[发明专利]依赖于混合抗体的循环肿瘤细胞分选和富集的方法

说明书

本发明公开了依赖于混合抗体的循环肿瘤细胞分选和富集的方法。该方法应用于早晚期的癌症病人临床样本的CTCs捕获分选。本发明的方法具有良好的循环癌细胞捕获效果。在血液1mL的情况下，晚期乳腺癌病人得到大于5个CTCs的捕获效果，同时应用间质型特异性抗体(波形蛋白抗体，anti‑vimentin antibody)修饰的系统捕获结果更接近依赖混合抗体系统(上皮和间质表型特征分子的抗体按照质量比1:1组合)的捕获结果；早期癌症病人依赖上皮型特异性抗体(上皮细胞吸附因子抗体，anti‑EpCAM antibody)修饰的抗体捕获的结果更接近依赖混合抗体系统的捕获结果。

技术领域

本发明属于现代医学技术，具体涉及一种细胞分选方法和系统，特别涉及一类依赖于混合抗体进行临床样本循环肿瘤细胞分选和富集的方法。

背景技术

癌症是发达国家第一位、发展中国家第二位的死亡病因。从临床上讲，造成癌症患者死亡率高的主要原因是疾病诊断的延迟和治疗方案的不恰当。从生理上来说，癌症造成的死亡大多数是由于肿瘤细胞通过血源性途径迁移到全身其他器官导致的。在这个过程中，转移癌细胞即循环癌细胞(circulating tumor cells,CTCs)在癌症转移中起着关键的作用。越来越多的证据表明肿瘤细胞从原发部位转移到其他部位在癌症发生的早期就已经发生。因此，一方面CTCs为癌症病人的早期和伴随诊断，以及个体化治疗提供了一个有效的渠道。另一方面，它们也可以提供转移性恶性肿瘤的相关生物学信息。

CTCs分为上皮型和间质型。在没有发生EMT转化时，CTCs表达特异性蛋白-上皮细胞吸附因子(epithelialcelladhesionmolecule，EpCAM或TACSTD1)，根据抗原抗体相互结合的原理可以将上皮型的CTCs富集分选。上皮细胞失去记性，经过细胞骨架重塑，转变成具有迁移能力的间叶细胞，即上皮细胞经历过上皮间质转化后，上皮表型逐渐消失，上皮型标记蛋白表达量逐渐减少，同时间质表型逐渐凸现出来，间质型特异性表达蛋白越来越多。间质型CTCs的富集不能依赖于上皮型细胞特异性蛋白抗体，必须依赖于间质型特异性蛋白抗体。

本发明将上皮型细胞特异性抗原和间质型细胞特异性抗原结合起来，为更准确的检测临床病人血液中的CTCs的数量以及对CTCs的异质性分析提供了可能。混合抗体组合使用组成了该发明的部分。上皮型抗体anti-EpCAM antibody和间质型抗体anti-vimentinantibody以1:1(质量比)的比例修饰在捕获装置或者载体上。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供循环肿瘤细胞的准确富集分选方法。以混合抗体修饰的捕获装置或载体为例，本发明展示了应用于早晚期的临床癌症病人捕获的CTCs情况。在血液1mL的情况下，晚期乳腺癌病人得到大于5个CTCs的捕获效果，同时应用混合型特异性抗体修饰的装置捕获结果明显大于依赖上皮型特异性抗体anti-EpCAM antibody捕获的结果；早期癌症病人依赖上皮型特异性抗体anti-EpCAM antibody捕获的结果更接近依赖混合抗体装置捕获结果。

一种依赖于混合抗体进行临床样本中循环肿瘤细胞分选和富集的方法，包括如下：