[发明专利]一种养猪场用的病原物快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种养猪场用的病原物快速检测试剂盒，其特征在于，包括把多种猪的细菌性疾病的抗体以及多种猪的细菌性疾病的抗体混合抗体以微阵列的形式，微阵列布局为8行×4列，均匀固定在固相载体表面，制备获得抗体芯片。

2.根据权利要求1所述的养猪场用的病原物快速检测试剂盒，其特征在于，包括6种猪的细菌性疾病的病原菌，包括猪沙门氏菌，猪副嗜血杆菌，胸膜肺炎放线杆菌，致病性猪链球菌，猪丹毒杆菌，支气管败血波氏杆菌。

3.根据权利要求2所述的养猪场用的病原物快速检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体包括玻璃片、硅片、硝酸纤维素膜、PVDF膜、云母片或者禽类蛋壳膜。

4.根据权利要求3所述的养猪场用的病原物快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的抗体芯片制备方法，包括以下步骤：

S1、将猪沙门氏菌，猪副嗜血杆菌，胸膜肺炎放线杆菌，致病性猪链球菌，猪丹毒杆菌，支气管败血波氏杆菌的抗血清进行纯化，使用辣根过氧化物酶标试剂盒对抗体进行标记；标记后的抗体进行混合；

S2、固相载体的预处理；

S3、使用pH7.5～8.5的30～40％的PBS缓冲液稀释纯化后的血清进行稀释，稀释浓度为0.1～2.5mg/mL，4℃保存备用；

S4、室温下，使用微阵列芯片点样仪进行点样，并设置阳性对照和阴性对照点，点样完成后，20～25℃固定1～5h，4℃保存备用。

5.根据权利要求4所述的养猪场用的病原物快速检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

(1)、将已点样的载体从4℃取出，置于室温平衡20～30min，PBS洗涤3次，每次3～5min；室温晾干；

(2)使用PBS配置0.5％的脱脂奶粉或者2％的BSA，将上述的固相载体置于其中封闭，室温，振荡100～110rpm，1h；

(3)PBS-T洗涤3次，每次5～10min；室温甩干；

(4)室温晾干后，向载体上的点分别滴加一系列浓度梯度的病原菌悬液和病原菌混合液，37℃，反应1～2h；

(5)PBS-T洗涤3次，每次5～10min；室温甩干；

(6)向载体上的点分别滴加标记的抗体，37℃孵育1～2h；

(7)PBS-T洗涤3次，每次5～10min，加TMB避光发色20～30min，使用0.5mol/L硫酸终止反应，去离子水漂洗3次，室温甩干；

(8)扫描仪扫描，记录实验结果。