[发明专利]一种养猪场用的病原物快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及动物病原物检测技术领域，尤其涉及一种养猪场用的病原物快速检测试剂盒。

背景技术

在中国大部分地区，人们的日常饮食中，猪肉的一种很重要的肉类消费品。近年来，随着百姓的生活水平提高，消费方式的升级，对肉类消费品的消费量也实现快速增长，同时也促进猪养殖业的快发扩大发展。生猪的养殖业逐步从家庭式养殖转变为专业养殖场养殖，我们知道，养殖场养殖规模一般都比较大，密度较大，如果生猪发病将会快速传染，这就需要对猪的各种可能发生的疾病进行密切关注。

研究表明，因为过渡的近亲繁殖和长时间的人工驯养，商品猪的抗病能力越来越差，很容易受到不同疾病的侵害，对猪的正常生长和繁殖造成了一定的影响，特别是某些细菌性疾病会严重冲击到养猪业的发展，需要重视对猪细菌性疾病的防治，因此，急需开发一些可以快速密切关注商品猪的健康状况的药物或者检测试剂盒。

发明内容

针对现有技术的上述不足，本发明提供一种养猪场用的病原物快速检测试剂盒，以解决上述的技术问题。

一种养猪场用的病原物快速检测试剂盒，包括把多种猪的细菌性疾病的抗体以及多种猪的细菌性疾病的抗体混合抗体以微阵列的形式，微阵列布局为8行×4列，均匀固定在固相载体表面，制备获得抗体芯片。

附图说明

图1是本发明的结构示意图。

其中：猪沙门氏菌单一抗体-1，猪副嗜血杆菌单一抗体-2，胸膜肺炎放线杆菌单一抗体-3，致病性猪链球菌单一抗体-4，猪丹毒杆菌单一抗体-5，支气管败血波氏杆菌单一抗体-6，阳性对照-7，阴性对照-8，以上六种混合抗体-9。

具体实施方式

结合以下实施例对本发明作进一步描述。

一种养猪场用的病原物快速检测试剂盒，如图1所示，包括把多种猪的细菌性疾病的抗体以及多种猪的细菌性疾病的抗体混合抗体以微阵列的形式，微阵列布局为8行×4列，均匀固定在固相载体表面，制备获得抗体芯片。

优选地，所述病原物包括6种猪的细菌性疾病的病原菌，包括猪沙门氏菌，猪副嗜血杆菌，胸膜肺炎放线杆菌，致病性猪链球菌，猪丹毒杆菌，支气管败血波氏杆菌。

优选地，所述固相载体包括玻璃片、硅片、硝酸纤维素膜、PVDF膜、云母片、禽类蛋壳膜或者动物肠道制备的动物肠道膜。

本发明的试剂盒可以同时检测多达6种猪的细菌性疾病病原菌，可以大大减少养殖户的检测成本和时间，提高效率。由于单次检测成本的下降，养殖场可以适当增加检测频率，把生猪的细菌性疾病抑制在爆发之前，减小安全风险，提高出栏生猪的质量，有利于生猪养殖业的健康发展。

作为优选的实施例，接下来将详细介绍以上所述的养猪场用的病原物快速检测试剂盒，所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

(1)、将已点样的载体从4℃取出，置于室温平衡20～30min，PBS洗涤3次，每次3～5min；室温晾干；

(2)使用PBS配置0.5％的脱脂奶粉或者2％的BSA，将上述的固相载体置于其中封闭，室温，振荡100～110rpm，1h；

(3)PBS-T洗涤3次，每次5～10min；室温甩干；

(4)室温晾干后，向载体上的点分别滴加一系列浓度梯度的病原菌悬液和病原菌混合液，37℃，反应1～2h；

(5)PBS-T洗涤3次，每次5～10min；室温甩干；

(6)向载体上的点分别滴加标记的抗体，37℃孵育1～2h；

(7)PBS-T洗涤3次，每次5～10min，加TMB避光发色20～30min，使用0.5mol/L硫酸终止反应，去离子水漂洗3次，室温甩干；

(8)扫描仪扫描，记录实验结果。

本发明创造性地将多种常见生猪病原菌的检测综合在一起，如果生猪发病有多种症状，或者在疾病高发季节，可以实现一次检测确定多种疾病。

作为另一个优选的实施例，以下将介绍以上所述试剂盒中的抗体芯片制备方法，包括以下步骤：

S1、将猪沙门氏菌，猪副嗜血杆菌，胸膜肺炎放线杆菌，致病性猪链球菌，猪丹毒杆菌，支气管败血波氏杆菌的抗血清进行纯化，使用辣根过氧化物酶标试剂盒对抗体进行标记；标记后的抗体进行混合；

S2、固相载体的预处理；

S3、使用pH7.5～8.5的30～40％的PBS缓冲液稀释纯化后的血清进行稀释，稀释浓度为0.1～2.5mg/mL，4℃保存备用；