[发明专利]一种野生百合组织培养方法

权利要求书

1.一种野生百合组织培养方法，其特征在于：所述组织培养方法包括如下步骤：

（1）诱导愈伤组织：取野生百合蒴果，将蒴果切开，选取生长健壮、胚明显的种子，除去种皮经消毒后接种在愈伤组织诱导培养基上，接种时控制种子长度的三分之二埋在培养基内，培养20-40天后，获得直径为0.3-0.5cm的淡黄色、颗粒状的胚性愈伤组织团块，所述愈伤组织诱导培养是在完全黑暗、温度为20-24℃的条件下进行；

所述愈伤组织诱导培养基配方为：1/2MS、2，4-二氯苯氧乙酸0.5-1.3mg/L、α-萘乙酸0.6-1.0mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1-0.4mg/L、氯化钠0.1-0.3mg/L、杀菌中草药粉0.1-2mg/L、葡萄糖20-26g/L、琼脂6-8g/L，pH值为5.6-5.8；

（2）愈伤组织的继代培养：愈伤组织诱导培养完成后，接种到继代培养基上进行继代培养，所述继代培养是在完全黑暗、20-25℃的继代培养条件下进行；

所述继代培养的培养基配方为：1/2MS、2，4-二氯苯氧乙酸0.5-1.1mg/L、2，4-D 0.6-1.1mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1-0.3mg/L、氯化钠0.1-0.2mg/L、杀菌中草药粉0.1-1.5mg/L、果糖20-25g/L、琼脂7-9g/L，pH值为5.6-5.8；

（3）愈伤组织的扩增培养：愈伤组织团块在继代培养基上继代培养4个月后，将愈伤组织团块分切成0.2-0.5cm的小块，接种到扩增培养基上，进行弱光培养，弱光培养是指在光照100-700lux、温度25℃的条件下进行；

所述扩增培养基配方为：1/2MS、2，4-二氯苯氧乙酸0.2-1.1mg/L、2，4-D 0.3-1.2mg/L、6-苄氨基腺嘌呤0.1-0.3mg/L、氯化钠0.1-0.3mg/L、杀菌中草药粉0.1-1.1mg/L、麦芽糖18-27g/L、土豆泥0.2-2g/L、琼脂6-10g/L，pH值为5.6-5.8。

2.根据权利要求1所述的野生百合组织培养方法，其特征在于：所述消毒的具体方法为将除去种皮的种子洗净后置于浓度为5-7%的盐水中浸洗10-20min，然后用蒸馏水冲洗0.5-1h，再用75％酒精浸泡0.5-2min。

3.根据权利要求1所述的野生百合组织培养方法，其特征在于：所述中草药的成分包括金银花、黄芩、艾草、槟榔、蒲公英。

4.根据权利要求1所述的野生百合组织培养方法，其特征在于：所述诱导愈伤组织的操作在超净工作台上完成。

5.根据权利要求1所述的野生百合组织培养方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养完成后，接种到继代培养基上之前，在超净工作台上用解剖刀切除愈伤组织团块中褐色部分。

6.根据权利要求1所述的野生百合组织培养方法，其特征在于：所述愈伤组织的继代培养过程中，每个装有继代培养基的培养皿中接种10-20块愈伤组织团块，愈伤组织团块的直径为0.2-0.4cm，每4周继代培养一次。

7.根据权利要求1所述的野生百合组织培养方法，其特征在于：所述将愈伤组织小块接种到扩增培养基之前，先接种到含继代培养基的培养皿上，用经灭菌后的保锡纸包裹三层后，进行10-20天的低温处理，低温处理条件为1-4℃。

8.根据权利要求7所述的野生百合组织培养方法，其特征在于：所述灭菌是采用紫外线照射进行灭菌。