[发明专利]一种用于口蹄疫疫苗146S含量检测的标准抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种用于口蹄疫疫苗146S含量检测的标准抗原制备方法，该方法使用二氯甲烷对口蹄疫病毒液进行抽提纯化，纯化效果能达到氯仿处理结果的水平，且与氯仿纯化试剂相比毒副作用更小，更易处理且对环境污染的风险性更低。

技术领域

本发明涉及一种用于口蹄疫疫苗146S抗原含量检测的标准抗原、及其制备方法和应用，属于生物制品领域。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性的动物疫病，对各国的畜牧业有着巨大的危害。目前，口蹄疫的防控措施主要是以广泛的大面积免疫预防为主，配合以扑杀疫区内的病畜和易感动物并在周围10公里范围内进行环形预防注射。

我国生产的口蹄疫疫苗基本上都是常规灭活疫苗，其制造工艺主要是用转瓶单层传代细胞培养法或悬浮培养法生产制苗用抗原，用二乙烯亚胺(BEI)对病毒进行灭活，利用油佐剂乳化配制疫苗。由于常规口蹄疫灭活疫苗生产中疫苗效力检验的关键作用，同时常规口蹄疫灭活疫苗作为当前控制口蹄疫疫病的主要武器，其安全有效的质量是防控口蹄疫的重要保障，因此如何更好的加强疫苗质量控制和相应的检测技术的研究直接关系到口蹄疫疫病防控的成功。

146S病毒粒子是口蹄疫的主要免疫抗原，生产过程中这种病毒粒子的降解会导致疫苗免疫效力的下降。而传统的监测方法不能准确定量口蹄疫疫苗中146S的含量。近年来利用蔗糖密度梯度离心后定量口蹄疫病毒液中的146S含量作为检测口蹄疫抗原含量的方法正逐渐被业内专家接受并认可，但由于缺少一套稳定的标准抗原的制备和保存方法，同时使用常规的灭活口蹄疫疫苗形式保存的146S标准抗原当检测含量时必须破乳后再进行检测，而破乳环节会一定程度破坏口蹄疫抗原液中的抗原成分，造成检测不准确，导致不同机构和口蹄疫生产厂家的检测结果间往往差异较大。因此如何稳定地制备标准抗原和在不使用乳化剂的条件下实现标准抗原的稳定保存，以提高后续检测结果准确性，是急需解决的问题。

专利申请CN102998378A公开了一种定量检测口蹄疫抗原146S的方法，该检测方法没有阳性对照，其存在批间检测无法矫正的缺点。

专利申请CN104491855A公开了一种大规模制备口蹄疫全病毒颗粒疫苗的方法，其存在过程控制困难，批间重复不稳定的缺点，且其针对口蹄疫疫苗生产设计，只适用于大规模生产。

因此，现实生产中缺少一种针对用于口蹄疫疫苗146S含量检测的标准抗原的、小规模的制备方法，其可以在制备口蹄疫全病毒颗粒疫苗中作为阳性对照使用，且其使得产品批间差异小，保证制备过程中抗原含量批间重复性，从而使得结果稳定。

此外，在现有实验室纯化口蹄疫抗原过程，经常使用氯仿作为纯化试剂，其存在毒副作用大，存在对操作人员健康的不利影响和对操作安全设备的要求较高，且在后续处理时会污染环境，由于氯仿还属于公安部门的管制药品，生产企业采购、储藏、使用、管理都有极为严格的限制，经常会给抗原的制备带来不便。因此，需要提供一种使用替代的纯化试剂纯化口蹄疫抗原方法，以降低制备过程中试剂的毒性和腐蚀性，简化制备程序和保证操作安全。

发明内容

本发明涉及一种口蹄疫疫苗146S含量检测的标准抗原制备方法，所述方法在纯化过程中采用了二氯甲烷作为纯化试剂，纯化效果能达到氯仿处理结果的水平，且与氯仿纯化试剂相比毒副作用更小，更易处理且对环境污染的风险性更低。

本发明涉及一种口蹄疫疫苗146S含量检测的标准抗原制备方法，其使用超滤管浓缩抗原，其抗原损失率大大降低且批间差最小最稳定，为制备定量口蹄疫标准抗原提供了有利的含量稳定性保障。

本发明涉及口蹄疫疫苗146S含量检测的标准抗原制备方法，其使用的保护剂保证了口蹄疫抗原在常温不易降解，使得在后续使用中口蹄疫标准抗原无需处理可直接上样检测，减少了操作误差，保障了结果的稳定性。