[发明专利]南极磷虾贮藏过程中导致其品质劣化的优势菌群确定方法

说明书

本发明提供一种南极磷虾贮藏过程中导致其品质劣化的优势菌群确定方法，属于食品领域。所述方法使用高通量测序法从不同温度贮藏条件下分析南极磷虾中微生物多样性，确定导致其品质劣化的优势菌群。为南极磷虾相关的食品加工条件提供参考依据。本发明方法检测南极磷虾样品中的微生物多样性和丰度均显著高于平板培养方法。

技术领域

本发明属于食品领域，具体地涉及一种南极磷虾贮藏过程中导致其品质劣化的优势菌群确定方法

背景技术

南极磷虾因其巨大的生物量、潜在的渔业资源以及在南极生态系统中的特殊地位而日益受到人们的关注。南极磷虾含有营养价值极其丰富的蛋白质、磷脂、不饱和脂肪酸等成分，在水产加工领域有着广泛的应用前景。受船舶条件、装备以及加工技术等的限制，目前中国作业船捕捞的南极磷虾原料，很大一部分在船上进行冻结、保藏，之后运输到陆地进行二次加工。在此过程中，南极磷虾在微生物和自身蛋白酶的作用下容易发生自溶，黑化，严重影响了南极磷虾的品质。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种南极磷虾贮藏过程中导致其品质劣化的优势菌群的确定方法，所述方法考察了南极磷虾在不同温度(A：0℃；B：4℃；C：16℃；D：25℃)贮藏条件下的微生物多样性，确定了导致其品质劣化的优势菌群，为南极磷虾加工的质量控制及后期的保鲜技术奠定了基础。

本发明是通过如下技术方案来实现的

一种南极磷虾贮藏过程中导致其品质劣化的优势菌群确定方法，所述方法包括如下步骤：

从-80℃取出南极磷虾样品，解冻后用无菌水冲洗磷虾表面，然后分别置于0℃、4℃、16℃和25℃培养箱；24h后进行高通量测序；

首先提取样品总DNA，分别用细菌引物V3/V4和真菌引物ITS1/ITS2扩增，获得条带后上机测序；Miseq测序序列中含有barcode序列，以及测序时加入的引物和接头序列；首先需要去除引物接头序列，再根据PE reads之间的overlap关系，将成对的reads拼接成一条序列，然后按照barcode标签序列识别并区分样品得到各样本数据，最后对各样本数据的质量进行质控过滤，得到各样本有效数据。在OTU聚类结果的基础上，获取每一个OTU聚类中的代表性序列；计算ACE/Chao/Shannon/Simpson/Coverage等物种多样性指数，并制作所有样品ACE/Chao/Shannon/Simpson/Richness指数的箱形图；基于物种分类分析，绘制物种分类条形图，物种丰度饼图，物种丰度热图；根据对已有测序微生物基因组的基因功能的构成分析结果和测序获得的物种构成，推测样本中的功能分类的构成；根据功能分类丰度，绘制功能分类条形图、丰度热图、丰度柱状图、丰度聚类树图。

进一步，所述的细菌引物V3-V4

序列F：CCTACGGGNGGCWGCAG；序列R：GACTACHVGGGTATCTAATCC。所述的真菌引物ITS1-ITS2序列F：CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA；序列R：GCTGCGTTCTTCATCGATGC。

本发明与现有技术相比的有益效果

本发明从不同温度(A：0℃；B：4℃；C：16℃；D：25℃)贮藏条件下分析南极磷虾中微生物多样性，确定导致其品质劣化的优势菌群。为南极磷虾相关的食品加工条件提供参考依据。

本发明使用高通量测序的检测南极磷虾样品中的微生物多样性和丰度均显著高于平板培养方法。

附图说明

图1是细菌多样性chao指数箱形图A：0℃(24h)；B：4℃(24h)；C：16℃(24h)；D：25℃(24h)；

图2是细菌多样性Simpson指数箱形图A：0℃(24h)；B：4℃(24h)；C：16℃(24h)；D：25℃(24h)；