[发明专利]番木瓜环斑病毒西瓜株系超表达载体的构建有效
| 申请号： | 201710598414.2 | 申请日： | 2017-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN108203715B | 公开（公告）日： | 2021-08-03 |
| 发明（设计）人： | 李向东;黄显德;田延平;耿超 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/83 | 分类号： | C12N15/83;C12N15/65 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 番木瓜 环斑 病毒 西瓜 株系超 表达 载体 构建 | ||
【权利要求书】：
1.一种番木瓜环斑病毒西瓜株系超表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）从番木瓜环斑病毒西瓜株系侵染的西葫芦叶片中提取总RNA，以Oligo dT为引物进行反转录，分四段扩增番木瓜环斑病毒西瓜株系全基因组，获得全基因组序列；
（2）用同源重组的方法将番木瓜环斑病毒西瓜株系全长cDNA分两次连接到带有35S启动子的pCambia0390载体上，获得侵染性克隆pCamPRSV；
（3）利用Seq ID No:22所示的引物和Seq ID No:23所示的引物扩增714bp的GFP基因，Seq ID No:24所示的引物和Seq ID No:25所示的引物扩增载体pCamPRSV，通过同源重组在pCamPRSV的NIb基因和CP基因间插入GFP基因，获得超表达载体pCamPRSV-GFP，序列如SeqID No:26所示。
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