[发明专利]一种利用纳米通道技术检测癌症的方法

权利要求书

1.一种利用纳米通道技术检测癌症的方法，该方法需要用到一种样品池，样品池分为cis和trans两个隔室（B，B'），隔室之间由120 -159μm的 Toflon薄膜隔离开，孔A与孔A'是用来第一次加液体和插入电极的，通过电极与膜片钳相连，将化学信号转化为电信号，之后液体的加入从下面三个小孔孔C和孔C'操作，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）在腔室B和腔室B'中分别放入磁子，然后分别从孔A和孔A'中注入超纯水；

（2）取出磁子，倒出超纯水，并反复冲洗Toflon薄膜、腔室及孔洞，最后用无水乙醇冲洗；

（3）冲洗干净后，用氮气将腔室内以及Toflon薄膜上残留的液滴吹干；

（4）在Toflon薄膜两边靠近微米孔处分别加入H液，并迅速吹开，使其在膜上延展散开；

（5）在腔室B和腔室B'中分别放入磁子，然后，从孔A和孔A'分别用移液器加入缓冲液，再分别插入Ag/AgCl电极；

（6）孔A的电极与探头的trans端相连，孔A'的电极与探头的cis端相连；

（7）分别在腔室B和腔室B'中加入L液，迅速轻吹，使L液在液面上均匀地铺开，然后等待30s-1min；

（8）从孔C和孔C'分别再加入缓冲液，观察是否形成磷脂双分子层，如形成，则进行后续实验；如未形成，则从孔C和孔C' 端反复吹打几次，直至其形成磷脂双分子层；

（9）在形成磷脂双分子层后，对系统施加电压，在孔B'中加入α-溶血素溶液，并开启孔B'的搅拌系统，控制合适的转速，搅拌约2min，形成纳米通道；

（10）形成纳米通道后，在孔B'中加入一定量的microRNA，开启搅拌系统，搅拌约5s后，开始收集检测信号。

2.根据权利要求1所述的一种利用纳米通道技术检测癌症的方法，其特征在于，步骤（1）中超纯水添加量以液面高于微米孔为准，计算出所需超纯水的体积2mL。

3.根据权利要求1和2所述的一种利用纳米通道技术检测癌症的方法，其特征在于，步骤（4）中加入的H液为10~15μL，H液为1mL戊烷与100μL十六烷的混合液。

4.根据权利要求1和2所述的一种利用纳米通道技术检测癌症的方法，其特征在于，步骤（5）中加入的缓冲液包含10mM Tris和1M KCl，加入量为0.8~1.1mL。

5.根据权利要求1和2所述的一种利用纳米通道技术检测癌症的方法，其特征在于，步骤（7）中加入的L液为15~25μL，L液为25mg磷脂与2.5mL戊烷的混合液。

6.根据权利要求1和2所述的一种利用纳米通道技术检测癌症的方法，其特征在于，步骤（8）中加入的的缓冲液为10mM Tris，加入量为0.8~1.1mL。

7.根据权利要求1和2所述的一种利用纳米通道技术检测癌症的方法，其特征在于，步骤（9）中对系统施加的电压为+180V~+200V，α-溶血素溶液的终浓度为0.0125~0.145ng/mL。