[发明专利]甾醇类半抗原‑碱性磷酸酶交联物的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断免疫分析领域。具体地说，本发明涉及甾体类半抗原-碱性磷酸酶交联物的交联物及其制备方法和包含所述交联物的化学发光检测试剂盒。

背景技术

免疫分析法是利用抗原-抗体的特异性结合反应检测各种物质(例如药物、激素、蛋白质、微生物等)的分析方法。

目前临床上进行免疫分析的方法主要有胶体金法、免疫比浊法、免疫荧光法、化学发光免疫分析法等。化学发光免疫分析法是一种较为先进的免疫学方法，具有反应时间短、灵敏度高、特异性好、线性范围宽、重复性好等优点，因此是市场应用前景最好且诊断最可靠的方法学为化学发光免疫分析法。

化学发光免疫分析法需要利用酶，例如碱性磷酸酶的交联物。酶结合物的好坏取决于酶本身的活性和优秀的制备工艺。而酶交联物的好坏直接影响免疫分析最后的测定结果，因此是免疫试剂的关键技术。

目前比较主流的酶标记技术有过碘酸钠法以及戊二醛法。然而，由于甾醇类半抗原不含伯氨基团，无法与碱性磷酸酶形成希夫氏碱，用传统的过碘酸钠法无法将碱性磷酸酶标记到甾醇类半抗原上；同样地，甾醇类半抗原也无法通过戊二醛与碱性磷酸酶结合。

因此，本领域急需能够高效地将碱性磷酸酶标记到甾醇类半抗原上的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供高效地将碱性磷酸酶标记到甾醇类半抗原上的方法以及由此得到的甾醇类半抗原-碱性磷酸酶交联物。

在第一方面，本发明提供甾醇类半抗原-碱性磷酸酶交联物的制备方法，包括以下步骤：

1)将式1所示含羧基的甾醇类半抗原与式2所示碳二亚胺类化合物反应得到式3所示O-酰基异脲中间体；

2)将步骤1)得到的O-酰基异脲中间体体与式4所示的N-羟基琥珀酰亚胺磺酸盐反应，得到式5所示的N-羟基琥珀酰亚胺中酯中间体；

3)将步骤2)得到N-羟基琥珀酰亚胺中酯中间体与碱性磷酸酶进行交联反应，得到式6所示的甾醇类半抗原-碱性磷酸酶交联物；

其中，R为甾醇类化合物；

R¹是取代或未取代的C_2-10烷基，优选C_2-6烷基，更优选C_2-3烷基，所述烷基由选自以下的取代基任选取代：卤素、羟基、硫基、氰基、硝基、C_1-3烷基、C_6-10芳基、C_1-3烷氧基、C_5-7杂环基和C_1-3卤代烷基；

R²是取代或未取代的环己烷基、异丙烷基、二甲基氨丙基团和吗啉乙基，取代基任选取代：卤素、羟基、硫基、氰基、硝基、C_1-3烷基、C_6-10芳基、C_1-3烷氧基、C_5-7杂环基和C_1-3卤代烷基；

ALP为碱性磷酸酶。

在具体的实施方式中，式1所示含羧基的甾醇类半抗原是：

6位修饰了O-羧甲基肟结构的式II所示雌激素类化合物：

其中，R³是羟基、氢、取代或未取代的C_1-3烷基、取代或未取代的C_2-3烯基、取代或未取代的C_2-3炔基、取代或未取代的C_1-3烷氧基；

R⁴是羟基、氢、取代或未取代的C_1-3烷基、取代或未取代的C_2-3烯基、取代或未取代的C_2-3炔基、取代或未取代的C_1-3烷氧基；

R⁵是羟基、氢、取代或未取代的C_1-3烷基、取代或未取代的C_2-3烯基、取代或未取代的C_2-3炔基、取代或未取代的C_1-3烷氧基；

R⁶是羟基、氢、取代或未取代的C_1-3烷基、取代或未取代的C_2-3烯基、取代或未取代的C_2-3炔基、取代或未取代的C_1-3烷氧基；