[发明专利]免疫荧光层析检测试纸条、免疫荧光层析检测系统以及确定样品中待测物含量的方法

说明书

本发明提出了免疫荧光层析检测试纸条、免疫荧光层析检测系统以及确定样品中待测物含量的方法。所述免疫荧光层析检测试纸条包括：本体，所述本体上限定出依次相连的样品区、结合区、检测区、吸附区；荧光微球标记的第一抗体，所述第一抗体包被于所述结合区，所述第一抗体特异性识别待测物；检测线和质控线，所述检测线和质控线设置在所述检测区中；第二抗体，所述第二抗体包被于所述检测线上，所述第二抗体特异性识别所述待测物；以及第三抗体，所述第三抗体包被于所述质控线上，所述第三抗体特异性识别所述第一抗体，其中，所述荧光微球为近红外II区高分子荧光微球。利用本发明的免疫荧光层析检测试纸条检测的准确性强、灵敏度高、精密度高。

技术领域

本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及免疫荧光层析检测试纸条、免疫荧光层析检测系统以及确定样品中待测物含量的方法。

背景技术

聚合物荧光微球作为一种特殊的功能微球，每个微球中可包裹数万甚至数十万个荧光分子，可大大提高荧光的标记效率，增强荧光分子的抗光漂白性能，极大地提高分析灵敏度；同时荧光微球表面可非常灵活地修饰多种功能基团(如羧基、氨基、醛基等)，有利于与蛋白或抗体的共价偶联和提高标记物的稳定性和标记效率。目前，荧光微球已广泛应用于标记、示踪、检测、成像、固定化酶、免疫医学、高通量药物筛选等。但是，传统荧光微球的发射均在可见光区域(发射波长小于780nm)，将其应用在生物活体、细胞或组织成像和体外诊断等领域时，容易造成荧光穿透性能差，背景荧光强。同时，由于其荧光量子效率普遍较低、激发和发射波长比较靠近(通常在20nm左右)等原因引起分析灵敏度降低，对荧光检测所需滤色片的要求很高。

因此，聚合物荧光微球有待进一步研究改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种免疫荧光层析检测试纸条、免疫荧光层析检测系统、确定样品中待测物含量的方法。本发明的免疫荧光层析检测试纸条上包被有荧光微球标记的抗体，该荧光微球的荧光量子效率高，且激发(365nm或740nm)和发射(900-1400nm)的波长，荧光检测时具有穿透能力强、背景干扰小的特点，从而使得检测结果的准确性强、灵敏度高、精密度高。

本发明主要是基于以下发现完成的：传统荧光微球荧光穿透性能差，背景荧光强，且由于荧光量子效率低、激发和发射波长比较靠近等原因，引起分析灵敏度降低、对滤色片要求很高。近红外荧光微球，尤其是近红外II区荧光微球荧光发射具有穿透力强、背景干扰小等特点，在活体成像、生物标记检测等方面具有良好的应用前景。然而，目前制备近红外II区荧光微球的方法仍具有局限性，例如针对疏水性强的荧光染料，无法直接应用于活体成像，必须要先进行亲水性改性，这种改性过程不仅步骤繁琐，且改性后的荧光染料分散在水溶液中后，其量子效率大幅度降低，严重影响荧光检测时的灵敏度。

有鉴于此，发明人发现可以利用溶胀法将荧光染料包裹在高分子微球内部，效果非常理想，该微球荧光量子效率可达到20％以上，在水溶液中可良好分散，方便各种生物大分子的标记，且针对不同荧光染料具有广泛适用性。进一步地，将获得的荧光微球标记于抗体上，并将该抗体包被于试纸条的结合区，从而使得利用该试纸条检测的准确性强、灵敏度高、精密度高。

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种免疫荧光层析检测试纸条。根据本发明的实施例，所述试纸条包括：本体，所述本体上限定出依次相连的样品区、结合区、检测区、吸附区；荧光微球标记的第一抗体，所述第一抗体包被于所述结合区，所述第一抗体特异性识别待测物；检测线和质控线，所述检测线和质控线设置在所述检测区中，且所述检测线靠近结合区；第二抗体，所述第二抗体包被于所述检测线上，所述第二抗体特异性识别所述待测物；以及第三抗体，所述第三抗体包被于所述质控线上，所述第三抗体特异性识别所述第一抗体，其中，所述荧光微球为近红外II区高分子荧光微球，所述近红外II区高分子荧光微球是通过下列方法获得的：

(1)利用与水不混溶的有机溶剂对荧光染料进行溶解，以便得到荧光染料溶液；