[发明专利]一种重组人源溶菌酶的层析方法在审
| 申请号： | 201710614064.4 | 申请日： | 2017-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN109295035A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 朱幼惠 | 申请（专利权）人： | 上海复华兴生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/36 | 分类号： | C12N9/36 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 201499 上海市奉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人源溶菌酶 分离纯化 层析 酵母菌发酵液 溶菌酶蛋白 生物大分子 新型阴离子 层析介质 复合填料 介质平衡 组合方式 消炎 处理量 工厂化 抗病毒 溶菌酶 洗脱液 抗菌 疏水 工作量 优化 | ||
1.一种重组人源溶菌酶的层析方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)装柱：
层析柱填充介质，并且预平衡；
所述的层析采用的介质是阴离子/疏水复合填料介质；
(2)上样：
将经过离心收集的发酵液上清样品通过预平衡的层析柱；
(3)清洗：
采用10-60mmol/L pH为5.4-7.4的磷酸缓冲液清洗层析柱；
其中，氯化钠的浓度低于0.3mol/L；
(4)洗脱：用10-60mol/L pH为5.4-7.4的磷酸缓冲液将溶菌酶蛋白从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰；
其中，氯化钠的浓度范围是0.5-3.0mol/L。
2.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，该方法包括样品预处理，去除含有重组人溶菌酶发酵培养液中的固体杂质，并收集发酵培养液上清。
3.如权利要求2所述的层析方法，其特征在于，所述的样品预处理利用连续流离心分离机或者过滤方法进行发酵液的固液分离。
4.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，所述的预平衡是指用10-60mmol/L pH为6.0-7.4的磷酸缓冲液平衡层析柱。
5.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，所述的预平衡以每分钟50-150ml的流速平衡3-7个柱体积。
6.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，所述的上样是将pH为6.0-7.0的样品通过预先用缓冲液平衡好的层析柱。
7.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，所述的样品指含有重组人溶菌酶的酵母菌培养液上清，电导强度为15-20ms/cm。
8.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，所述的清洗是用20-30mmol/L pH为6.0-7.0的磷酸缓冲液平衡层析柱，2-3个柱体积。
9.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，用于洗脱的磷酸缓冲液是含有0.5-3.0mol/L氯化钠。
10.如权利要求1所述的层析方法，其特征在于，收集的洗脱峰蛋白经脱盐、冻干，制成无菌冻干粉。
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