[发明专利]一种铁皮石斛内生真菌菌株及其产生的胞外多糖以及该胞外多糖的提取方法与应用

说明书

本发明公开了一种铁皮石斛内生真菌菌株及其产生的胞外多糖以及该胞外多糖的提取方法与应用。该铁皮石斛内生真菌菌株属于甘蔗镰孢霉菌。本发明铁皮石斛内生真菌菌株产生的胞外多糖对包括金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌的致病菌具有很好的抑制活性作用。本发明通过如下流程提取所述胞外多糖：菌株活化‑种子液培养‑发酵培养‑发酵液真空抽滤‑抽滤液真空浓缩‑浓缩液醇沉‑沉淀离心‑沉淀水溶后透析‑透析液真空冷冻干燥‑获得所述胞外多糖。本发明的提取方法为大规模提取铁皮石斛内生真菌菌株产生的胞外多糖提供了新路径，同时为通过改进内生真菌与宿主植物的相互作用提高胞外多糖产量提供新的思路。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种铁皮石斛内生真菌菌株及其产生的胞外多糖以及该胞外多糖的提取方法与应用。

背景技术

二十一世纪以来内生真菌的研究重点在于对植物内生真菌的研究与开发利用。我国的药用植物资源丰富多样，利用内生菌资源库，发掘出代谢产物中低毒、高效、低廉的抗癌药物、抗菌药物、杀虫剂、抗氧化剂、植物激素、免疫抑制剂等具有非常重要的意义。

铁皮石斛为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物，分布于安徽、浙江、江西、广东、广西、云南、贵州等省区，既是名优花卉又是传统名贵中药材，秦汉时期的《神农本草经》一记载铁皮石斛“主伤中、除痹、下气、补五脏虚劳赢瘦、强阴、久服厚肠胃”；成书于一千多年前的道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首；为千百年来历代帝皇梦寐以来的宝物，素有“千金草”之称，驰名中外，被国际药用植物界称为“药界大熊猫”。民间称其为“救命仙草”。一般生长在人迹罕至的深山老林和悬崖峭壁上的阴面崖缝间。铁皮石斛通过风及虫传播繁殖,从种子萌发进入到商品阶段需2-3 年才能采收。由于铁皮石斛特殊的生长环境和自身繁殖极为困难，以及人们的过度采挖，目前铁皮石斛的野生资源已日趋减少，至1987年，被列为国家重点保护野生植物，在《中国植物红皮书》中被列为濒危种，现己成为国家二级保护植物。

此外，铁皮石斛的主要活性成分为多糖，药理药效研究也显示其主要药用成分为多糖化合物，目前已在其中分离得到近30种多糖化合物，但是至今仍鲜有关铁皮石斛内生真菌及其相关活性的报道。

利用植物内生真菌这一尚未深入挖掘的宝库，同时植物内生真菌在筛选活性物质方面，表现出的巨大潜力，合成的次生代谢产物不但化学成分丰富。而且也具有多种多样的生物活性的特点，选取传统药用植物铁皮石斛(Dendrobium Officinale)作为宿主植物分离内生真菌，针对从铁皮石斛根部筛选的内生真菌进行形态和分子生物学鉴定，并对其产生的胞外多糖的抗菌活性进行研究。发掘铁皮石斛内生真菌中具有高活性的宝贵天然药物资源，以期为人类健康发展做出应有的贡献。

发明内容

本发明的目的在于提供一种铁皮石斛内生真菌菌株，该菌株属于甘蔗镰孢霉菌(Fusarium sacchari)，是采用内生真菌分离纯化技术从铁皮石斛 (DendrobiumoffiCinale Kimura et Migo)植物活体中分离、纯化得到。

本发明的目的还在于提供所述的一种铁皮石斛内生真菌菌株产生的胞外多糖，该胞外多糖具有良好的抑制病原菌的效果。

本发明的目的还在于提供一种提取所述的铁皮石斛内生真菌菌株产生的胞外多糖的方法，该方法包括如下流程：菌株活化-种子液培养-发酵培养-发酵液真空抽滤-抽滤液真空浓缩-浓缩液醇沉-沉淀离心-沉淀水溶后透析-透析液真空冷冻干燥-获得冻干粉，即为所述胞外多糖。

本发明的目的还在于提供所述的一种铁皮石斛内生真菌菌株产生的胞外多糖在抑制病原菌中的应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现。