[发明专利]一种活细胞中Cr3+

权利要求书

1.一种活细胞中Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺的荧光成像方法，其特征在于：以化合物N,N’,N’’-三[4-(苯并噻唑-2-基)-2,5-二羟基苯甲醛]缩-(3-氨乙基)胺作为活细胞内微量金属离子Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺的荧光成像探针，探针与活细胞相容，渗透到细胞内，通过探针对细胞内Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺染色后，用荧光倒置显微镜检测荧光细胞图像；所述的探针的化学结构式为：

 ；

所述的通过探针对细胞内Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺染色后，用荧光倒置显微镜检测荧光细胞图像，是按下述方法进行：

（1）细胞培养：活细胞经复苏接种于含10%胎牛血清以及含1%双抗的培养基中，在培养箱中培养，传代后，接种于12孔板中培养，密度为2×10⁴个/ml，次日用培养基清洗细胞；

（2）探针对细胞孵育：将（1）的细胞中加入探针浓度为10~40μM的培养液，培养箱内孵育30~80min，吸出含探针的培养液，用培养基清洗细胞，置于荧光倒置显微镜下分别进行明场和暗场拍照，明场下观察到细胞清晰的图像，暗场下没有观察到细胞图像；所述培养液的组成为体积比为98%培养基和2% N,N-二甲基甲酰胺；

（3）Cr³⁺对细胞染色：将（2）的细胞中加入由体积比为9/1的培养基/H₂O组成的Cr³⁺浓度为60~120μM的溶液，培养箱中孵育30~60min，用培养基清洗细胞，置于荧光倒置显微镜的蓝色通道下观察探针对细胞内Cr³⁺染色后的荧光像，细胞呈现明亮的蓝色荧光，拍摄得到清晰的蓝色荧光细胞轮廓影像，探针在活细胞中检测到微量Cr³⁺离子；

（4）Al³⁺对细胞染色：将（2）的细胞中加入由体积比为9/1的培养基/H₂O组成的Al³⁺浓度为60~120μM的溶液，培养箱中孵育30~60min，用培养基清洗细胞，置于荧光倒置显微镜的蓝色通道下观察探针对细胞内Al³⁺染色后的荧光像，细胞呈现明亮的蓝色荧光，拍摄得到清晰的蓝色荧光细胞轮廓影像，探针在活细胞中检测到微量Al³⁺离子；

（5）探针对细胞孵育：将（1）的细胞中加入探针浓度为10~40μM的培养液，培养液的组成为体积比为98%培养基，2% 1,4-二氧六环，培养箱内孵育20~60min，吸出含探针的培养液，用培养基清洗细胞，置于荧光倒置显微镜下分别进行场明场和暗场拍照，明场下观察到细胞清晰的图像，暗场下没有观察到细胞图像；

（6）Zn²⁺对细胞染色：将（5）的细胞中加入由体积比为9/1的培养基/H₂O组成的Zn²⁺浓度为60~120μM的溶液，培养箱中孵育30~80min，用培养基清洗细胞，置于荧光倒置显微镜的绿色通道下观察探针对细胞内Zn²⁺染色后的荧光像，细胞呈现绿色荧光，拍摄得到清晰的绿色荧光细胞轮廓影像，探针在活细胞中检测到微量Zn²⁺离子；再将上述细胞置于荧光倒置显微镜的红色通道下观察探针对细胞内Zn²⁺染色后的荧光像，细胞呈现红色荧光，拍摄得到清晰的红色荧光细胞轮廓影像，探针在活细胞中检测到微量Zn²⁺离子；

所述的荧光倒置显微镜是蓝色通道的激发波长为330~385nm，绿色通道的激发波长为450nm~490nm，红色通道的激发波长为510nm~550nm的荧光倒置显微镜。

2.如权利要求1所述的活细胞中Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺的荧光成像方法，其特征在于：所述的培养基是RPMI-1640培养基。