[发明专利]一种基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法

权利要求书

1.一种基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法，其特征在于：所述基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法包括以下步骤：

步骤一，进行生物样品的制备和处理，经处理后取用5-10mg的生物样品置于1.5ml离心管一中，加入细胞裂解液破碎细胞，形成裂解的细胞溶液，并通过离心分离收集上清液；

步骤二，对步骤一中所述上清液加入纳米磁珠悬浮液进行核酸吸附，并弃掉完成核酸吸附后的上清液，收集吸附后的核酸-纳米磁珠复合物；

步骤三，将步骤二中所述核酸-纳米磁珠复合物进行纯化及洗脱，并保留含核酸的上清液，从而获得纯度在1.7-2.1以及得率在9-40μg的核酸溶液；

所述纳米磁珠悬浮液中的纳米磁珠为超顺磁性四氧化三铁磁性颗粒或伽马三氧化二铁磁性颗粒，直径为20-400nm。

2.根据权利要求1所述的基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法，其特征在于：所述步骤一的主要工艺过程如下：

(1)在1.5ml离心管一中加入500-600μl的所述细胞裂解液，以进行生物样品细胞的破碎，使生物样品细胞释放出核酸，从而获得所述裂解的细胞溶液；

(2)将步骤一(1)中的1.5ml离心管一于50-70℃下水浴加热10分钟，并进行间断混合；

(3)向步骤一(2)中的1.5ml离心管一加入100-120μl的多糖-蛋白去除液和100-120μl的无水乙醇，并进行混匀；

(4)将步骤一(3)中的1.5ml离心管一室温下放置5分钟后，再对该1.5ml离心管一以13000r/min的转速离心分离3min后，收集所述上清液。

3.根据权利要求2所述的基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法，其特征在于：所述步骤二的主要工艺过程如下：

(1)取步骤一(4)所述上清液500-700μl置于1.5ml离心管二中，再加入300-420μl的异丙醇并进行混匀；

(2)向步骤二(1)中的1.5ml离心管二再加入10-30μl的混匀的所述纳米磁珠悬浮液，再对该1.5ml离心管二以50-200r/min的转速混匀1-20分钟；

(3)将步骤二(2)中的1.5ml离心管二室温下放置5分钟，并进行间歇混匀；

(4)将步骤二(3)中的1.5ml离心管二再放置于磁力分离架上3-5分钟后，弃掉1.5ml离心管二中的所述纳米磁珠悬浮液吸附核酸后的上清液，收集吸附后的所述核酸-纳米磁珠复合物。

4.根据权利要求3所述的基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法，其特征在于：所述步骤三的主要工艺过程如下：

(1)向步骤二(4)所述核酸-纳米磁珠复合物中加入600μl核酸洗涤液，使得所述核酸-纳米磁珠复合物与所述核酸洗涤液混合10秒钟；

(2)将步骤三(1)中的1.5ml离心管二室温下放置5分钟，并进行间歇混匀；

(3)将步骤三(2)中的1.5ml离心管二再放置于磁力分离架上1-3分钟后，弃掉1.5ml离心管二中的上清液，收集洗涤后的核酸-纳米磁珠复合物；

(4)依次重复步骤三(1)、步骤三(2)和步骤三(3)0-2次，以保证对1.5ml离心管二中所述核酸-纳米磁珠复合物上杂质的充分洗涤；

(5)向步骤三(4)洗涤后的核酸-纳米磁珠复合物中加入50-200μl的核酸洗脱液，再对该1.5ml离心管二以50-200r/min的转速混匀1-10分钟，以保证洗脱所述纳米磁珠上的核酸样品；

(6)将步骤三(5)中的1.5ml离心管二放置于磁力分离架上5分钟后，收集1.5ml离心管二中含核酸的上清液，从而获得纯度在1.7-2.1以及得率在9-40μg的所述核酸溶液。

5.根据权利要求1或2所述的基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法，其特征在于：所述细胞裂解液包括：三羟甲基氨基甲烷20mM，浓度在0.05-5％的细胞及蛋白变性剂，浓度在1-5mM的乙二胺四乙酸，所述细胞裂解液的pH值＝7.5-8.5，且该细胞裂解液经121℃高温及灭菌处理20分钟。