[发明专利]一种基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法

说明书

本发明提供一种基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法，包括以下步骤：步骤一，进行生物样品的制备和处理，经处理后取用5‑10mg的生物样品置于1.5ml离心管一中，加入细胞裂解液破碎细胞，并通过离心分离收集上清液；步骤二，对步骤一中上清液加入纳米磁珠悬浮液进行核酸吸附，收集吸附后的核酸‑纳米磁珠复合物；步骤三，将步骤二中核酸‑纳米磁珠复合物进行纯化及洗脱，获得纯度在1.7‑2.1以及得率在9‑40μg的核酸溶液。本发明采用该方法，能够基于纳米磁珠法实现由几毫克至十几毫克范围内的生物样品中提取纯化出完整性好、纯度高且得率高的DNA及或RNA生物大分子，以有效避免生物样品需求量过多对珍贵或稀有的人体组织、生物标本、考古及法医鉴定等样品的损伤。

技术领域

本发明涉及磁珠法提取纯化核酸生物技术领域，尤其涉及一种基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法。

背景技术

核酸包括脱氧核糖核酸(RNA)和核糖核酸(DNA)两类，其在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些嗜菌体DNA有时为单链环状分子，RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子，不同类型的RNA分子可以具有不同的结构特点，至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状等。目前，在生物医学的各个领域都离不开核酸的提取和纯化，但是，现有的用于生物样品核酸提取及纯化的方法在实际使用过程中存在如下问题：

1、采用苯酚氯仿等有机溶剂法进行生物样品核酸的提取和纯化时，苯酚氯仿等往往有毒且会产生异味，影响操作人员的健康，该方法还需要多次离心，故使得核酸的提取和纯化过程耗时长，同时难以实现自动化。

2、柱膜法提取纯化生物样品核酸的方法虽然能够简化操作流程，然而其在核酸提取及纯化过程中小片段易丢失，且仍需要多次离心或负压进行提取纯化，另外还容易造成交叉污染。

3、磁珠法作为新的核酸提取方法，因其操作简单，不需要负压或反复离心，且易于自动化等优点受到了越来越广泛的应用，但是，该方法大多依据于现有核酸提取纯化步骤进行操作，对起始生物样品的需求量仍在上百毫克，故难以保证对珍贵或稀有的人体组织、生物标本、考古及法医鉴定等样品的核酸的高效提取纯化。

发明内容

本发明的主要目的在于解决现有技术中存在的问题，提供一种能够基于纳米磁珠法实现由几毫克至十几毫克范围内的生物样品中提取纯化出完整性好、纯度高且得率高的的DNA及或RNA生物大分子，以有效避免生物样品需求量过多对珍贵或稀有的人体组织、生物标本、考古及法医鉴定等样品的损伤，并直接将提取的核酸再经调配和稀释即可满足生物、医药、食品、诊断及疾控等领域核酸大分子制备需要的基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法，其中所述基于纳米磁珠的生物样品核酸提取纯化方法包括以下步骤：

步骤一，进行生物样品的制备和处理，经处理后取用5-10mg的生物样品置于1.5ml离心管一中，加入细胞裂解液破碎细胞，形成裂解的细胞溶液，并通过离心分离收集上清液；

步骤二，对步骤一中所述上清液加入纳米磁珠悬浮液进行核酸吸附，并弃掉完成核酸吸附后的上清液，收集吸附后的核酸-纳米磁珠复合物；

步骤三，将步骤二中所述核酸-纳米磁珠复合物进行纯化及洗脱，并保留含核酸的上清液，从而获得纯度在1.7-2.1以及得率在9-40μg的核酸溶液；

所述纳米磁珠悬浮液中的纳米磁珠为超顺磁性四氧化三铁磁性颗粒或伽马三氧化二铁磁性颗粒，直径为20-400nm。

进一步地，所述步骤一的主要工艺过程如下：