[发明专利]一种山葡萄种质资源的鉴定方法及其应用

说明书

本发明涉及分子鉴定技术领域，具体而言，涉及一种山葡萄种质资源的鉴定方法及其应用，所述方法包括以下步骤：扩增待测样品的psbA‑trnH和/或ITS2序列片段并测序；参照不同已知山葡萄种的psbA‑trnH和/或ITS2条形码序列进行序列比对，以确定待测样品的山葡萄种。本发明提供的山葡萄种质资源的鉴定方法将psbA‑trnH序列与ITS2序列相结合，将psbA‑trnH序列作为山葡萄种质资源的DNA条形码序列，同时将ITS2序列作为psbA‑trnH序列的补充序列，来提高山葡萄种质资源的鉴别效率，可用于山葡萄的种间和种内资源的鉴定。

技术领域

本发明涉及分子鉴定技术领域，具体而言，涉及一种山葡萄种质资源的鉴定方法及其应用。

背景技术

山葡萄(Vitis amurensis)属于东亚种群，为葡萄科葡萄属(Vitis)落叶藤本，是葡萄属中最抗寒的一个种。枝蔓可耐-45℃低温，根系可耐-16℃低温，原产于我国东北、华北及朝鲜北部、前苏联远东地区。野生山葡萄资源在我国长白山和小兴安岭山脉极为丰富，是我国野生果树驯化栽培最成功的果树之一。山葡萄浆果营养价值丰富，同时是酿造高档葡萄酒的优质原料，纯种山葡萄也对白粉病、白腐病等有较强的抵抗力，是国内外培育抗寒、抗病、优质新品种的宝贵种质资源及砧木育种资源。目前中国农业科学院特产研究所、吉林省农业科学院果树研究所、中国农业科学院郑州果树研究所、西北农林科技大学等单位保存部分山葡萄种质资源。农业部于1988年出资建立了国家果树种质左家山葡萄圃，挂靠于中国农业科学院特产研究所，该圃现保存种质资源400余份，主要来自黑龙江、吉林、辽宁和河北等地，其中从黑龙江收集的资源占65％以上，其中包括在世界范围内首次发现的四倍体山葡萄种质4N1和两性花山葡萄种质双庆。该山葡萄圃在世界上保存山葡萄种质份数最多，已成为全国山葡萄生产示范和优良品种推广的基地及山葡萄种质资源教学、研究、利用的平台。因此，对山葡萄种质资源进行鉴定研究具有重要的意义。

DNA条形码(DNA barcoding)是应用一种相对较短、易扩增、有足够变异的DNA序列来进行物种分类、鉴别的分子生物学技术。该技术由加拿大动物学家Hebert等首次提出，并分析了动物界11个门13320个物种的(cytochrome c oxidase subuit 1)CO1基因序列，发现该序列种间变异能够对物种进行成功鉴定，自此CO1基因成为动物界中标准的DNA条形码基因。而在植物中CO1基因进化较慢，虽然各种DNA条形码在不同植物中都有研究，但并没有发现能够鉴别所有物种的标准序列。2009年CBOL(Consortium for the Barcode of Life)通过大量的研究，提出将rbcL+matK序列组合作为植物分子鉴定的核心条形码，中国植物条形码研究组应用1757种植物对序列/序列组合psbA-trnH、ITS/ITS2及rbcL+matK进行鉴别能力评价，并提出将ITS/ITS2序列作为种子植物的核心条形码。Vinitha等对姜科7个属20个种的60份样本进行分析，发现ITS序列在测试样本中的鉴定成功率较高。目前，ITS、ITS2、psbA-trnH、rbcL、matK和rbcL+matK这几个候选序列/序列组合扩增成功率和物种识别率较高，通用性较好，是植物条形码研究中重点推荐的候选序列，多数研究都在某一物种的种及以上水平，因此要确定某一植物科、属、种及品种合适的DNA条形码序列就要进行深入的研究和筛选。

山葡萄资源丰富，目前资源鉴定都以形态学标记为主，这种方法简单但易受到季节变化、栽培管理方式、环境因子和主观判断因素的影响，致使苗木市场出现同名异物、同物异名的现象，严重影响山葡萄产业的发展。对山葡萄种质资源的鉴别是目前研究和资源利用的难题之一。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种山葡萄种质资源的鉴定方法，以解决上述问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种山葡萄种质资源的鉴定方法，包括以下步骤：