[发明专利]莲藕中一种新马铃薯Y病毒科病毒的检测试剂盒及其检测方法有效
申请号: | 201710621619.8 | 申请日: | 2017-07-27 |
公开(公告)号: | CN107385108B | 公开(公告)日: | 2020-10-23 |
发明(设计)人: | 贺振;刘娴;董婷婷;朱延达;陈春峰;李良俊 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/94 |
代理公司: | 南京钟山专利代理有限公司 32252 | 代理人: | 戴朝荣 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 莲藕 一种 马铃薯 病毒科 病毒 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
1.莲藕中一种新马铃薯Y病毒科病毒的检测试剂盒,其特征在于,包括两条特异性引物:
SPLVF2-1:5’-GAATCGTATCAATCCTTGAG-3’;
SPLVR3-1:5’-GCTTCTGCGACATCACTAAAG-3’;
所述特异性引物SPLVF2-1和SPLVR3-1根据莲藕小RNA高通量测序获得的一种新马铃薯Y病毒科病毒序列设计并合成。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+和PCR反应缓冲液。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括标准阳性模板。
4.一种莲藕中新马铃薯Y病毒科病毒的检测方法,其特征在于,其包括以下步骤:
(1)提取待测样品总RNA;
(2)设计并合成引物:根据莲藕小RNA高通量测序分析结果,设计并合成该新马铃薯Y病毒科病毒的特异性引物SPLVF2-1和SPLVR3-1,所述SPLVF2-1的核苷酸序列为:5’-GAATCGTATCAATCCTTGAG-3’,所述SPLVR3-1的核苷酸序列为:5’-GCTTCTGCGACATCACTAAAG-3’;
(3)RT-PCR
①反转录合成cDNA,以莲藕总RNA为模板,以SPLVR3-1引物,通过反转录酶合成cDNA;
②PCR扩增,以cDNA为模板,以SPLVF2-1和SPLVR3-1为引物,进行PCR反应,PCR程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,54℃退火1min,72℃延伸1min,共进行35个循环,72℃延伸7min,4℃保存;
(4)电泳检测
吸取2.5μL RT-PCR产物进行0.8-1.5%的琼脂糖凝胶电泳,经核酸染色Goldview,通过凝胶成像仪观察,在感染该新型马铃薯Y病毒科病毒的莲藕样品中有895bp的核酸条带。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,所述步骤(1)中总RNA提取法采用的是多糖多酚植物组织的裂解法。
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