[发明专利]睾丸酮丛毛单胞菌HHALA-001及采用该菌株生产L-丙氨酸的方法

说明书

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种睾丸酮丛毛单胞菌HHALA‑001及采用该菌株生产L‑丙氨酸的方法；所述菌株的保藏编号为：CGMCC No.14064；本发明通过复合诱变、反复筛选获得上述睾丸酮丛毛单胞菌HHALA‑001，该菌株酶活高，可达到11.80U～12.22U，可高效表达L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶，用于催化L‑天冬氨酸生产L‑丙氨酸，可大幅度提高L‑丙氨酸的生产效率和转化率，有助于降低生产成本，且稳定性较好；经使用后，L‑天冬氨酸的转化率可达99.9％；本发明完全符合工业L‑丙氨酸菌株的诱变和筛选需求，可应用于工业化生产，具有重大的经济价值。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种睾丸酮丛毛单胞菌HHALA-001及采用该菌株生产L-丙氨酸的方法。

背景技术

L-丙氨酸是生命体内与糖代谢密切相关的氨基酸之一，在食品和医药领域有着广泛的用途，市场需求量很大。目前，L-丙氨酸的生产方法一般有蛋白水解提取法、发酵法和酶转化法。其中，酶转化法是指通过富有L-天冬氨酸-β-脱羧酶活力的微生物细胞催化L-天冬氨酸，以得到L-丙氨酸。由于酶转化法具有生产成本低、生产过程简单、产品收率和纯度高等优势而在工业上被广泛应用。现有技术中，虽然已有可转化L-天冬氨酸的菌株，但却存在酶活不够，L-丙氨酸的转化率及转化效率低下等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种睾丸酮丛毛单胞菌HHALA-001及采用该菌株生产L-丙氨酸的方法，通过该菌株可大幅度提高L-丙氨酸的转化率和转化效率。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastes tosteroni)HHALA-001，该菌株已于2017年4月24日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.14064。

睾丸酮丛毛单胞菌HHALA-001是从生产L-天冬氨酸的排污沟中取样，经分离活化、复合诱变、反复筛选得到的一株革兰氏阴性细菌。

形态特征：菌株在30℃下，NA培养基上培养24小时后，菌落浅黄色，圆形，表面凸起，湿润，半透明，边缘整齐。菌体呈杆状，大小为(0.3-0.5)um×(0.8-1.8)um，细胞单个或成对排列，通过革兰氏染色后在显微镜下呈阴性。

生理生化特征：琥珀酸盐产碱、络氨酸芳胺酶、吡咯烷基芳胺酶、乳酸盐产碱反应结果为阳性。

根据其形态特征和生理生化特征，鉴定该菌株为睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastes tosteroni)HHALA-001。

该菌株可用来转化L-天冬氨酸以生产L-丙氨酸，在实际应用中，该菌株能以自身发酵液为酶源，转化L-天冬氨酸，得到L-丙氨酸。

上述技术方案产生的有益效果在于：本发明通过复合诱变、反复筛选获得上述睾丸酮丛毛单胞菌HHALA-001，该菌株酶活高，可达到11.80U～12.22U(其中酶活单位U定义为：单位体积发酵液在单位时间内生成L-丙氨酸的量，单位为μmol/min/mL。)，可高效表达L-天冬氨酸-β-脱羧酶，用于催化L-天冬氨酸生产L-丙氨酸，可大幅度提高L-丙氨酸的生产效率和转化率，有助于降低生产成本，且稳定性较好。经使用后，L-天冬氨酸的转化率可达99.9％。本发明完全符合工业L-丙氨酸菌株的诱变和筛选需求，可应用于工业化生产，具有重大的经济价值。

具体实施方式

本发明提供一种睾丸酮丛毛单胞菌HHALA-001，菌株的获得过程及生产L-丙氨酸的方法如下：

一、睾丸酮丛毛单胞菌HHALA-001的获得

(一)分离和筛选方法包括如下步骤：

(1)从生产L-天冬氨酸的车间的排污沟中采集污泥样本；