[发明专利]一种检测甘草酸的试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测甘草酸的试纸条，其特征在于，所述试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和基板；其中，所述反应膜上具有包被有甘草酸半抗原-载体蛋白偶联物的检测区和包被有羊抗鼠抗抗体的质控区，所述结合物释放垫上喷涂有甘草酸单克隆抗体-胶体金复合物，其中所述甘草酸单克隆抗体是以甘草酸半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原对小鼠进行免疫所得杂交瘤细胞株分离得到，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC13828。

2.根据权利要求1所述的检测甘草酸的试纸条，其特征在于，其中，所述甘草酸半抗原-载体蛋白偶联物由甘草酸半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为人血清白蛋白、卵清蛋白或甲胎蛋白，所述甘草酸半抗原，分子结构式为：

3.根据权利要求1所述的检测甘草酸的试纸条，其特征在于，其中，所述羊抗鼠抗抗体是以鼠源IgG抗体为免疫原对山羊进行免疫制备获得。

4.根据权利要求1所述的检测甘草酸的试纸条，其特征在于，其中，所述反应膜、吸水垫、结合物释放垫、样品吸收垫依次粘贴在基板上，其中吸水垫覆盖反应膜顶端1-2mm处，结合物释放垫覆盖反应膜底端1-2mm处，样品吸收垫覆盖结合物释放垫底部1/3-1/2部分，检测区和质控区间隔0.5-1cm。

5.根据权利要求1所述的检测甘草酸的试纸条，其特征在于，其中，所述检测区的检测限浓度100μg/L。

6.根据权利要求1所述的检测甘草酸的试纸条，其特征在于，其中，所述基板为PVC基板或其他硬质不吸水的材料；所述结合物释放垫及样品吸收垫为玻璃纤维素膜或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

7.权利要求1所述的检测甘草酸的试纸条的制备方法，其特征在于，其中，包括以下步骤：

1)将甘草酸与1-(4-氨基-苯)碳二酰肼反应，制备甘草酸半抗原；

2)将甘草酸半抗原与载体蛋白偶联，制备甘草酸半抗原-载体蛋白偶联物；

3)用甘草酸半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌甘草酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；

5)分别将甘草酸半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠抗抗体包被于反应膜的检测区T线和质控区C线，检测区和质控区间隔0.5-1cm；

6)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；将制备的甘草酸单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到甘草酸单克隆抗体-胶体金复合物；

7)将甘草酸单克隆抗体-胶体金复合物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；

8)将样品吸收垫用含牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液浸泡，烘干；

9)在基板上按顺序粘贴上反应膜、吸水垫、结合物释放垫、样品吸收垫，吸水垫覆盖反应膜顶端1-2mm处，结合物释放垫覆盖反应膜底端1-2mm处，样品吸收垫覆盖结合物释放垫底部1/3-1/2部分，最后切成4mm宽的小条。