[发明专利]一种检测甘草酸的试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种检测甘草酸的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和基板；其中，所述反应膜上具有包被有甘草酸半抗原‑载体蛋白偶联物的检测区和包被有羊抗鼠抗抗体的质控区，所述结合物释放垫上喷涂有甘草酸单克隆抗体‑胶体金复合物，本发明还提供一种应用上述试纸条检测样品中甘草酸的方法，本发明提供的试纸条和检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、可快速读取结果、成本低等特点，适合大量样品的筛查及中药现场质量监控。

技术领域

本发明涉及一种检测试纸条，具体是一种用于检测甘草酸的免疫胶体金试纸条，其特别适用于中药材、饮片、中成药、保健品、食品、化妆品等中甘草酸含量的检测。

背景技术

现代研究证实，甘草酸(Glycyrrhizic acid，GA，C₄₂H₆₂O₁₆)是中药甘草中的主要生物活性物质，含有两分子葡萄糖醛酸和一分子甘草次酸，分子量约为822Da，其含量在3％～13％，具有抗炎、抗溃疡、抗过敏、抗氧化、免疫调节、抗病毒、抗癌、保肝和稳定细胞膜等作用。甘草及其制剂常以甘草酸作为定量指标，用于评价药材和成药的质量、制剂的稳定性及优劣，以制订药品质量标准等。因此，对甘草酸的定量分析在中药的研究上很有现实意义。

目前，国内中药材有效成分含量测定的常用方法有化学定量法、比色法、紫外分光光度法、红外光谱法、气相色谱法、薄层色谱法、高压液相色谱法等，各种方法均有其缺点；HPLC与GC法灵敏度高、结果准确，是《中国药典》含量测定的主要技术，但都存在设备昂贵、需专业技术人员、检测周期长、检测成本高等缺点。免疫分析技术是近年来中药有效成分分析技术的新热点。

基于甘草酸单克隆抗体免疫反应原理建立的胶体金法具有检测灵敏度、特异性高，不需复杂的样品前处理、快速，5分钟即可读出结果，成本低廉、无需大型仪器设备，适合于野外及现场检测，可定性、定量等优点；该技术对于中药活性成分的分析将是一个重要的补充技术和有力手段，适用于中药材及其制剂有效成分的大量样本检测及现场监控。

对小分子中药活性成分采用单抗建立的免疫检测方法已经有报道，如现有技术中中药活性成分甘草酸的单克隆抗体制备及其免疫测定法的建立报道的抗GA的单抗可用于中药材甘草酸含量的测定，但其检测的灵敏度和便利性取决于单抗的特异性，和检测方法的操作性。但甘草酸的特征结构容易受载体蛋白的局部微化学环境或空间位阻的干扰，影响机体免疫系统的识别，难以产生特异性抗体或产生的抗体效价较低。

发明内容

现有技术的灵敏度尚存在问题，而且检测方法的便利性需要解决。

采用试纸检测的便利性显而易见，但需要灵敏度高的单抗，而现有单抗的特异性无法满足试纸检测的要求。

为此，本发明对单抗的种类进行了筛选，找到一种经过改进的灵敏度和特异性极高的单抗，满足了制备试纸的条件。

本发明对甘草苷小分子结构进行了改造，然后再与载体蛋白偶联后免疫动物产生单克隆抗体，这样可以保证甘草苷的原有分子特征结构充分暴露在人工抗原的表面，使其能最大限度地被动物的免疫活性细胞所识别，从而刺激机体产生特异性免疫应答，产生对甘草苷具有高亲和力和高特异性的抗体。

本发明提供了一种检测甘草酸的免疫胶体金试纸条。具体是一种用胶体金免疫层析技术检测中药甘草及其制剂中甘草酸的含量，该方法特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测，是理想的快速筛选手段。

本发明另一个发明目的是提供该试纸条的制备方法。

本发明的另一个发明目的是提供该试纸条的应用。

本发明是通过下述技术方案实现的：

一种甘草苷半抗原，其分子结构式：