[发明专利]用于多基因联合检测妇科肿瘤的引物组、试剂盒、文库及应用

说明书

本发明涉及生化检测领域，具体涉及一种用于多基因联合检测妇科肿瘤的引物组、试剂盒、文库及应用。所述的用于多基因联合检测妇科肿瘤的引物组，可在同一PCR反应体系中对14个致癌基因APC、AKT1、BRAF、CTNNB1、EGFR、FBXW7、KRAS、NRAS、PIK3CA、PPP2R1A、PTEN、TP53、BRCA1、BRCA2进行特异性扩增；本发明还提供了一种包含上述引物组的试剂盒，该试剂盒基于多重PCR靶向捕获技术，可以在8h内轻松地完成目标序列的富集，获得可以直接上机测序的高质量文库。利用上述试剂盒建构建好的测序文库，结合二代测序技术，可以检测到1％甚至更低频率的变异，同时假阳性率极低。

技术领域

本发明涉及生化检测领域，具体涉及一种用于多基因联合检测妇科肿瘤的引物组、试剂盒、文库及应用。

背景技术

中国女性生殖道恶性肿瘤发病率居于女性恶性肿瘤的首位，是妇癌患者死亡的主要原因之一，造成妇癌患者死亡率居高不下的主要原因是缺乏早期筛查方法，尤其是卵巢癌。因此，寻求一种早期、简便、特异、无创的筛查方法是改善妇科恶性肿瘤患者预后的亟待解决的重要问题。

早期筛查方法的建立可使妇癌患者得以早发现、早诊断、早治疗，使患者生存率提高、死亡率降低，从而达到推动女性生殖道恶性肿瘤预防控制的目标。此外，特异性基因筛查也可作为治疗后的监测指标预测恶性肿瘤的复发，为判断预后及制定个性化治疗方案提供理论依据。

高通量基因组技术(如微阵列，二代测序技术)的发展为我们实现这个目标提供可能。2012年美国癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)显示了卵巢癌全基因图谱，发现卵巢癌普遍存在高比率的p53、PI3K、KRAS和B-RAF突变。对子宫内膜癌的基因分析也有类似的发现。这些癌症的共同遗传特征提供了一个对宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢癌进行早期癌症诊断的机会。根据已发表的子宫内膜癌和卵巢癌的数据，大约12～14个基因可以代表这两种癌症共有致癌基因，包括：APC、AKT1、BRAF、BRCA1、BRCA2、CTNNB1、EGFR、FBXW7、KRAS、NRAS、PIK3CA、PPP2R1A、PTEN、TP53。与常规液基细胞学异常细胞相比，这些致癌基因突变是肿瘤克隆的特异性标志物，并且在非肿瘤正常细胞中缺乏，而且现有的分子生物学方法可以对宫颈细胞标本中癌细胞进行高敏感性和特异性检测。

随着高通量测序技术的日益成熟，基因检测用于精准医疗越来越成为共识，但临床应用要求基因检测周期短、检测成本低和检测准确性高等条件。靶向测序可以解决基因检测周期短(由于只检测目标区域，因此数据分析周期大大缩短)的问题，同时在一定程度上降低测序成本，因此靶向测序是临床应用的一个趋势。靶向测序有两种较为成熟的方法，其一是液相杂交捕获技术，该技术成熟、稳定，但往往建库周期较长(3天左右)，需要较多的贵重仪器(例如打断仪器等)，建库实验成本难以降低等，因此不利于临床推广；靶向测序另一方法是多重PCR捕获技术，其优点是建库实验快、周期短(1天)、不需要额外的设备及检测成本低的优势，便于在实验室开展。

发明内容

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种用于多基因联合检测妇科肿瘤的引物组。

本发明的另一目的在于提供一种用于多基因联合检测妇科肿瘤的试剂盒，该试剂盒包括上述用于多基因联合检测妇科肿瘤的引物组。

本发明的再一目的在于提供一种用于多基因联合检测妇科肿瘤的二代测序DNA文库。

本发明的第四个目的在于提供上述用于多基因联合检测妇科肿瘤的二代测序DNA文库的构建方法。

本发明的第五个目的在于提供上述用于多基因联合检测妇科肿瘤的引物组、试剂盒和二代测序DNA文库的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：