[发明专利]一种锚定巢式多重PCR联合高通量测序检测基因融合的多重PCR引物和方法有效
| 申请号： | 201710636174.0 | 申请日： | 2017-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN107385042B | 公开（公告）日： | 2021-01-01 |
| 发明（设计）人： | 周艳河;张燕菲;何广良;张纪斌;许少飞;赖炳权 | 申请（专利权）人： | 广州永诺健康科技有限公司;广州永诺医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6848;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 宋静娜;郝传鑫 |
| 地址： | 510000 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 锚定 多重 pcr 联合 通量 检测 基因 融合 引物 方法 | ||
1.一种锚定巢式多重PCR联合高通量测序检测基因融合的多重PCR引物，
其特征在于，包括多重PCR特异性引物组1和多重PCR特异性引物组2，所述多重PCR特异性引物组1为SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:32所示的核苷酸序列组成的引物组，所述多重PCR特异性引物组2为SEQ ID NO:33～SEQ ID NO:64所示的核苷酸序列组成的引物组。
2.一种锚定巢式多重PCR联合高通量测序检测基因融合的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的多重PCR引物，还包括接头序列、锚定引物1以及锚定引物2；
所述接头序列包括接头序列的长序列和接头序列的短序列，所述接头序列的长序列由顺次连接的上游测序引物互补序列、标签序列、接头序列的短序列的互补序列组成；
所述锚定引物2由所述接头序列的长序列的一部分序列组成；
所述锚定引物1由所述锚定引物2的一部分序列组成。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述标签序列是长度为10个碱基的DNA序列。
4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述接头序列的长序列的序列如SEQID NO:67所示，所述接头序列的短序列的序列如SEQ ID NO:68所示。
5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述锚定引物1的序列如SEQ ID NO:65所示，所述锚定引物2的序列如SEQ ID NO:66所示。
6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于区分样品的带标签序列的下游测序引物互补序列。
7.一种采用如权利要求1所述的多重PCR引物检测基因融合的方法，所述方法为非诊断用途。
8.如权利要求1所述的多重PCR引物在制备检测基因融合的试剂盒中的用途。
9.一种采用如权利要求2-6任一所述的试剂盒检测基因融合的方法，其特征在于，所述方法为非诊断用途，包括以下步骤：
(1)以检测样本的总RNA为模板，高温打断后，利用随机引物进行反转录，得到cDNA第一链后，再进行cDNA第二链的合成；
(2)将双链cDNA进行末端修复和接头序列的连接；
(3)对连接上述接头序列的产物进行第一轮多重PCR反应，其中上游引物为所述锚定引物1，下游引物为多重PCR基因特异性引物组1；
(4)对上述第一轮多重PCR反应得到的产物进行第二轮多重PCR反应，得到目标区域文库，其中上游引物为锚定引物2，下游引物为多重PCR引物组和用于区分样品的带标签序列的下游测序引物互补序列的组合；
(5)通过测序的方法确定基因是否发生融合以及融合的方式。
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