[发明专利]一种新型表达Cry3A杀虫蛋白的植物内生工程菌及其构建方法与应用在审
| 申请号： | 201710637658.7 | 申请日： | 2017-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN107312739A | 公开（公告）日： | 2017-11-03 |
| 发明（设计）人： | 李阳;张立钦;吴酬飞;叶建仁 | 申请（专利权）人： | 湖州师范学院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/32;A01N63/00;A01N63/02;A01P7/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司11246 | 代理人： | 袁彩君 |
| 地址： | 313000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 表达 cry3a 杀虫 蛋白 植物 工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种新型表达Cry3A杀虫蛋白的植物内生工程菌，其特征在于：该工程菌的DNA序列如序列表SEQ ID NO：1所示。
2.一种新型表达Cry3A杀虫蛋白的植物内生工程菌的构建方法，其特征在于：包括如下步骤，
(1)Cry3Aa的人工合成：Cry3Aa的密码子序列来自于苏云金芽孢杆菌，通过引物设计，合成DNA；
(2)重组质粒构建：将T7RNA聚合酶基因利用同源重组的方式连接到PHKT2载体上，得到重组质粒pHKT2-T7RNA pol；在重组质粒pHKT2-T7RNA pol上构建吡咯伯克霍尔德氏菌B.pyrrocinia-Cry3Aa表达载体质粒，得到重组质粒pHKT2-Cry3Aa；
(3)Cry3Aa基因在吡咯伯克霍尔德氏菌B.pyrrocinia JK-SH007中的表达：将重组质粒pHKT2-Cry3Aa导入B.pyrrocinia JK-SH007感受态细胞,涂布浓度为50ug/mL含甲氧苄啶抗生素的LB抗性平板上，30℃过夜培养；Cry3Aa的蛋白表达通过将重组菌接于LB培养基，采用30℃，220r/min摇培，待OD600＝0.8时,加终浓度为0.1mmol/L IPTG,并迅速升温到42℃，继续培养4h，然后取工程菌液离心，再将沉淀重悬于PBS缓冲液,利用超声波破碎后离心收集细胞裂解液。
3.如权利要求2所述的一种新型表达Cry3A杀虫蛋白的植物内生工程菌的构建方法，其特征在于：所述的Cry3Aa根据大肠杆菌密码子偏好进行过优化。
4.一种新型表达Cry3A杀虫蛋白的植物内生工程菌在防治榆蓝叶甲中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湖州师范学院，未经湖州师范学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710637658.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种含氟碳树脂与丙烯酸改性环氧树脂的涂料
- 下一篇：一种粉末喷涂砂纹漆
