[发明专利]液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法

权利要求书

1.液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法，其特征在于，包括：用提取液处理生物组织均匀样本；

氨基酸标准品配制；

其中，所述生物组织均匀样本包括血清、尿和脑脊液；

所述用提取液处理生物组织均匀样本具体包括：

(i)将样本放入-80℃冰箱冷冻；

(ii)将冷冻后的样本4-6μL，按照样本与提取液的体积比4：991，与提取液混合；

(iii)加入内标氘代苯丙氨酸，涡旋混合，内标氘代苯丙氨酸在最终待测样本溶液中的体积比为0.5％；

(iv)12000rpm、4℃离心，取上清液，待测；

所述氨基酸标准品配制包括：

(a)血清样本氨基酸检测

对L-2-氨基己二酸和叶酸，均用含0.1％甲酸的水溶液配制为100μg·mL^-1的标准品母液；

对其余氨基酸，用超纯水配制成1mg·mL^-1的标准品母液；

用提取液稀释标准品母液，配制混合标准品；

(b)尿样本和脑脊液样本氨基酸检测

对高半胱氨酸和L-2氨基己二酸，用含0.1％甲酸的水溶液分别配制为100μg·mL^-1、1mg·mL^-1的标准品母液；

对其余氨基酸，加超纯水分别配制成浓度为1mg·mL^-1的标准品母液；

用提取液稀释标准品母液，配制混合标准品；

所述的提取液包括：

乙腈，其浓度为85％；

缓冲液，由浓度为0.1％的甲酸和浓度为1.7mM的甲酸铵组成；

所述提取液的pH为4.32。

2.根据权利要求1所述的方法，还包括以下步骤：

a)对氨基酸标准品进行母子离子对、锥孔电压和碰撞能量摸索；

b)液相色谱质谱联用条件和质谱条件优化；

c)求得氨基酸标准曲线；

d)液相色谱质谱联用检测生物样本中氨基酸含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的液相色谱质谱联用条件包括：

Waters ACQUITYUPLC系统，包括四元泵溶剂系统，在线脱气机和自动进样器；

XEVO TQ-S检测器，MassLynxTM V4.1质谱工作站软件；

色谱柱：ACQUITY UPLC BEHAmide，规格：100mm×2.1mm，1.7μm；

流动相A：乙腈，含1mmol·L^-1甲酸铵和0.2％甲酸，

B：超纯水，含1mmol·L^-1甲酸铵和0.1％甲酸；

梯度洗脱：

流速：0.3mL·min^-1，柱温：40℃，进样量：5μL；

所述的质谱条件包括：

ESI离子源：正离子模式；毛细管电压：0.4KV；去溶剂温度：400℃；去溶剂气流速：800L/Hr；锥孔气流速：150L/hr；雾化气压力：7.0Bar；采用MRM方式进行采集。