[发明专利]液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法，包括用提取液处理样本，该提取液由液相色谱的流动相组成，包括乙腈和缓冲液，乙腈的浓度为50％‑95％，缓冲液由浓度为0.1％‑0.3％的甲酸和浓度为1‑10mM的甲酸铵组成，或者由浓度为0.1％‑0.3％的乙酸和浓度为1‑10mM的乙酸铵组成，该提取液的pH在3‑5.5之间。本发明公开的方法可以对血液、尿及脑脊液等生物组织均匀样本进行直接检测，样本处理方法简单，样本用量少，可低至4μl，检测灵敏度高，可达pg/ml级，可检测的氨基酸浓度范围宽，基质干扰小，检测准确度高，能同时检测的氨基酸种类多达29种，且检测时间短。

技术领域

本发明申请属于仪器分析领域，具体涉及一种用液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法。

背景技术

氨基酸的检测分析是生命科学、食品科学、临床医学等领域的重要研究手段，因此对氨基酸分析方法的研究与改进具有重要的意义。氨基酸分析方法从1958年首先实现自动化，随后逐渐发展，灵敏度、准确度、自动化程度都在逐渐提高。

2008年Boogers等人将UPLC与Accq·tag(Waters公司)在线衍生法联用，分析酪蛋白和血清白蛋白中水解的氨基酸。

Accq·tag方法作为目前应用广泛的一种氨基酸分析方法，需要购买试剂包与试剂盒，成本较高，氨基酸需要进行衍生化，实验前的操作相对繁琐，且衍生剂只能保存一周，检测成本高，易水解的氨基酸无法测定，能够检测的氨基酸类型受限。

生物组织类型多，不同的生物组织其物理性质、化学组成都不尽相同，相应地，其氨基酸组成含量的测量方法也不尽相同。

发明内容

至少针对以上所述问题之一，本发明提供了用液相色谱质谱联用直接检测生物组织均匀样本中氨基酸的方法，该方法包括用提取液处理生物组织均匀样本，所述提取液包括液相色谱的流动相。

作为本发明可选实施例，提取液可以包括：

乙腈，其浓度为50％-95％；

缓冲液，由浓度为0.1％-0.3％的甲酸和浓度为1-10mM的甲酸铵组成，或者由浓度为 0.1％-0.3％的乙酸和浓度为1-10mM的乙酸铵组成；

所述提取液的pH在3-5.5之间。

作为本发明公开可选实施例，提取液的制备方法可以包括：

(a)将乙腈、甲酸或乙酸、甲酸铵或乙酸铵按照100:0.1:0.2的体积比混合，超声混匀，得到有机相；

(b)将水和甲酸或乙酸按照100:0.1的体积比混合，超声混匀，得到水相；

(c)将得到的有机相和水相，按照5-6:1的体积比混合，超声混匀，得到提取液。

作为本发明公开可选实施例，提取液可以与液相色谱初始流动相组成相同。

作为本发明公开可选实施例，生物组织均匀样本可以包括血清、尿或脑脊液。

作为本发明公开可选实施例，生物组织均匀样本的处理方法可以包括：

(i)将样本放入-80℃冰箱冷冻；

(ii)将冷冻后的样本，按照样本与提取液的体积比4：991，加入提取液；

(iii)加入内标氘代苯丙氨酸，涡旋混合，内标氘代苯丙氨酸在最终待测样本溶液中的体积比为0.5％；

(iv)12000rpm、4℃离心，取上清液，待测。

进一步，作为本发明公开可选实施例，提取液的pH可以在4.0-4.8之间。