[发明专利]一种普通野生稻组织培养快繁方法

权利要求书

1.一种普通野生稻组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为1-2％的洗洁精水溶液浸泡5-15min，自来水冲洗10-20min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡1-2min，再于含有2％活性氧的浓度为0.003-0.006％的次氯酸钠溶液中浸泡5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；

(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于22-26℃下避光培养18-24天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和海带提取物0.3-0.5mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；

(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于22-26℃下光照培养25-30天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂0.2-1.0mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、KT 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和芦荟提取物0.5-0.8mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；

(4)丛生芽的培养：将步骤(3)中得到的无菌试管苗丛生芽转入第三培养基中培养30-40天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到健壮植株；所述第三培养基是向MS培养基中添加6-BA 0.2-0.4mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小麦胚芽提取物0.4-0.7mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；

(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于第四培养基中进行15-25天的生根培养，培养温度为22-26℃，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，得到带根完整植株；所述第四培养基是向1/2MS培养基中添加NAA 0.1-1.0mg/L、AC 1.0-1.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和小球藻提取物0.1-0.3mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；

(6)炼苗与移栽：向步骤(5)的培养基中加入少量自来水，炼苗一周，待表面角质形成后将苗取出，并将苗根部洗净，立即移栽到水田中；

步骤(2)中，所述海带提取物的制备方法为：取新鲜海带磨碎，加入10-20体积倍的水中进行胶体磨处理5-8min，70-80℃下水浴提取10-12h，趁热抽滤，收集滤液，重复提取2-3次，合并滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4，再加入3-4体积倍的乙醇中沉淀20-24h，离心，收集沉淀，即得所述海带提取物；

步骤(3)中，所述芦荟提取物的制备方法为：将新鲜芦荟与水等量混合，并绞碎成芦荟浆汁，向芦荟浆汁中加入0.6-0.9％的淀粉酶进行酶解处理1-2h，酶解后加入1-2体积倍的90-95％的乙醇中混匀，浸制20-25天，将浸制后的混合液于80-90℃下水浴加热蒸干乙醇，再加入等量的蒸馏水混匀，即得所述芦荟提取物；

步骤(4)中，所述小麦胚芽提取物的制备方法为：将小麦胚芽粉碎，加入4-6重量倍的体积浓度为75-85％甲醇溶液中研磨30-40min，高速冷冻离心8-10min，取上清液，即得所述小麦胚芽提取物；

步骤(5)中，所述小球藻提取物的制备方法为：取新鲜小球藻磨碎，加入4-5体积倍的体积分数为80-90％的乙醇中回流提取2-4h，重复提取2-3次，合并提取液，将合并后的提取液浓缩至原体积的1/4后，加入3-4体积倍的体积分数为60-70％的乙醇中静置12-24h，离心，过滤，取沉淀用水溶醇沉法反复洗涤纯化至检测不到还原糖反应，再经无水乙醇多次洗涤，即得所述小球藻提取物。

2.根据权利要求1所述一种普通野生稻组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(1)中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。