[发明专利]一种普通野生稻组织培养快繁方法

说明书

本发明涉及植物快繁技术领域，特别涉及一种普通野生稻组织培养快繁方法，所述方法包括如下步骤：水稻种子的选择与消毒；将种子接种到含海带提取物的培养基中培养获得无菌试管苗；将试管苗接种到含芦荟提取物的培养基中培养获得丛生芽；将丛生芽接种到含小麦胚芽提取物的培养基中培养获得健壮植株；将健壮植株移接至含小球藻提取物的培养基中培养获得带根的完整植株。与传统方法相比，本发明通过对快速繁殖各阶段的培养基进行优化，进一步提高了野生稻种子发芽率，促进丛生芽的繁殖和分化，增强了新生植株的生根能力，得到的新生苗长势好，株苗健壮，显著提高了野生水稻组织培养快繁的成功率。

【技术领域】

本发明涉及植物快繁技术领域，特别涉及一种普通野生稻组织培养快繁方法。

【背景技术】

普通野生稻(OryzarufipogonGriff.)为禾本科植物，是水稻的祖先，国家二级保护植物。考古学家通过对挖掘出土的稻秆、稻叶进行外形特征鉴定，证明了中国在7000年前就已经培育出了水稻，比盛产水稻的泰国栽培历史还早1000多年。普通野生稻是水稻的近缘祖先，亲和性好，杂交结实率极高，为水稻育种提供珍贵的遗传资料，并为阐明水稻起源和演化提供理论基础，有重要科学价值。

植物组织培养始于20世纪初，之后这项技术得到了迅速的发展，渗透到植物生理学、遗传学、育种学及生物化学等领域，并成为了一项举世瞩目的现代生物技术，在农业、林业和医药业有广泛的应用。植物组织培养技术把植物的细胞、组织和器官等在无菌条件下置入培养基上，培养基中有植物所需的所有营养和控制植物生长分化的植物生长调节物质。在适宜的环境条件下，植物的一个细胞或很小的一块组织就能长成一株幼苗。培育的水稻幼苗可以继续切割和再次培养，从而得到大量的幼苗。由于植物组织培养的快速繁殖比常规方法的繁殖速度快万倍到数百万倍，并且不受地区和气候的影响，可以及时提供大量优质幼苗。

对于普通野生稻而言，收获成熟种子较难，而且种子休眠性很强，这给繁殖带来了一定困难。如果用组织培养技术使之快速繁殖，1粒种子即可得到无数株再生幼苗。普通野生稻是水稻遗传育种工作中的宝贵物质资源，在研究稻种起源，演化，分类及分离和重组的研究工作中，普通野生稻起到不可替代的作用。

【发明内容】

鉴于上述内容，本发明提供了一种普通野生稻组织培养快繁方法，该方法能够快速繁殖出大量适合移栽的优良普通野生稻种苗。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种普通野生稻组织培养快繁方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取普通野生稻种子作为外植体，剥除稻壳后，用体积分数为1-2％的洗洁精水溶液浸泡5-15min，自来水冲洗10-20min，冲洗后置于75％的乙醇中浸泡1-2min，再于含有2％活性氧的浓度为0.003-0.006％的次氯酸钠溶液中浸泡5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次，并用消毒滤纸吸干表面水分，得到外植体；

(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)中获得的外植体接种到第一培养基中，于22-26℃下避光培养18-24天，种子发芽后获得无菌试管苗；所述第一培养基是向MS培养基中添加GA3 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和海带提取物0.3-0.5mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；

(3)试管苗丛生芽的繁殖培养：将步骤(2)中得到的试管苗置于第二培养基中，于22-26℃下光照培养25-30天，光照强度为1200-1800lux，光照时间为8-10小时/天，获得无菌试管苗丛生芽；所述第二培养基是向MS培养基中添加芸苔素内脂0.2-1.0mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、KT 0.1-0.5mg/L、蔗糖20-25mg/L、琼脂3-5mg/L和芦荟提取物0.5-0.8mg/L，并将pH调整为5.5-6.0制得；