[发明专利]一种包含细胞靶向抗体及Poly(I：C)的化合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种包含细胞靶向抗体及Poly(I:C)的化合物，所述化合物以磷酸钙纳米颗粒为内核，内核表面接枝有PEI，内核表面吸附载有Poly(I:C)，内核外部为二氧化硅外壳，所述二氧化硅外壳通过环己烷‑1‑羧酸‑3‑磺基琥珀酰亚胺酯连接四种不同的细胞靶向抗体。进一步的，本发明还提供了上述化合物的制备方法以及医药用途。本发明可有效实现poly(I:C)靶向到达肝内细胞，从而使poly(I:C)与TLR3结合，通过激活不同免疫细胞TLR3介导的信号通路，增强干扰素和促炎因子的产生，起到抗HBV病毒的的作用。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种包含细胞靶向抗体及Poly(I:C)的化合物CaP/PEI/poly(I:C)/SiO₂-S-Ab及其制备方法和应用。

背景技术

在多种纳米颗粒中，磷酸钙纳米颗粒具有高生物相容性、高生物降解性、体积小以及高亲和力，可与一些核酸共价功能化等特性，因其有可观的应用前景。该纳米颗粒已被用于各种领域,如转染、基因沉默、药物传输、光动力治疗等。一些大分子物质常常无法穿透细胞膜,因此,一个有效的载体如纳米颗粒是必需的。

磷酸钙纳米颗粒的大小约100纳米很容易被细胞摄取，随后溶解在溶酶体中。多项研究证实多壳包裹的磷酸钙纳米颗粒可在免疫学中用途广泛,例如用于预防性和治疗性免疫和特定的B细胞活化。

据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过乙型肝炎病毒(HBV)，其中约2亿4千万人为慢性HBV感染者，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞肝癌。慢性乙型肝炎是我国现阶段最为突出的公共卫生问题之一。目前，慢性乙肝尚缺乏有效的治疗手段，干扰素治疗仅能抑制20-40％慢性乙肝患者病毒复制，核苷类似物的药效也因病毒的耐受性突变而大大降低。近来，越来越多的研究表明，天然免疫识别受体Toll样受体(TLR)的激动剂作为免疫调节剂或免疫佐剂，有望成为治疗病毒感染、炎症性疾病和肿瘤的新型药物。

天然免疫针对的主要靶分子称为病原相关分子模式(PAMP)，相对应的识别受体称为模式识别受体(PRR)。PAMP主要指病原体细胞表面的分子或核酸成分，它们在进化中趋于保守，是病原体生存所必须得。来源于病原体的核酸，包括单链和双链RNA，是PAMP的其中一大类。TLR是PRR中的一大家族，TLR3位于细胞内，能够识别病毒的双链RNA。人工合成的双链RNA类似物聚肌胞胞苷酸(poly(I:C))，为TLR3的配体，能够被TLR3识别并激活TLR3，另外poly(I:C)还能被黑色素瘤分化相关基因5(MDA-5)所识别。

TLR3在胞内识别poly(I:C)并被其激活后，能够募集下游的衔接蛋白MyD88和TRIF，TLR3可通过MyD88依赖途径诱导炎症性细胞因子如IL-1、TNF-α、IL-6和IL-12的表达，参与非特异性抗病毒反应，同时通过MyD88非依赖途径诱导共刺激分子CD80和CD86以及IFN-β、IP-10等抗病毒性细胞因子的表达，参与诱导DC的分化成熟以及抗病毒免疫反应。胞质的MDA-5可在线粒体外模被线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)所招募。MDA-5虽然与TLR3利用的是不同的衔接蛋白，但下游的信号通路是相同的，都能激活一系列的转录因子，包括IRF3,IRF7和NF-κB，诱导抗炎或促炎因子(IL-6,IL-10),I型干扰素(IFN-α/β)以及共刺激分子的表达。

相关的实验证实了poly(I:C)在体外刺激肝实质细胞(肝细胞)及肝非实质细胞(kupffer细胞和肝窦内皮细胞)能产生IFN-β并抑制HBV的复制。另外，用poly(I:C)高压水注射治疗HBV感染的小鼠，结果表明通过poly(I:C)治疗能够清除HBV病毒，其清除HBV的作用有依于干扰素的产生，且poly(I:C)的抗病毒作用必须通过高压水注射的方式激活肝内的TLR3。在小鼠模型中可以通过高压水注射的方式激活肝内的TLR3，但这一方法不能用于人类，目前暂时无法有效的将poly(I:C)导入到患者的肝内。因此急需一种有效载体，使得poly(I:C)能够通过静脉注射的方式靶向激活肝内的TLR3。

发明内容