[发明专利]用于检测导致犊牛腹泻的两种主要寄生虫的LAMP引物组合及其应用

权利要求书

1.用于检测导致犊牛腹泻的牛艾美尔球虫和微小隐孢子虫的LAMP引物组合，其特征在于，所述引物组合为引物组Ⅰ和引物组Ⅱ；

所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成，核苷酸序列如SEQ ID NO.1~6所示；

所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ-F3、引物Ⅱ-B3、引物Ⅱ-FIP、引物Ⅱ-BIP、引物Ⅱ-LF和引物Ⅱ-LB组成，核苷酸序列如SEQ ID NO.7~12所示。

2.含有权利要求1所述引物组合的试剂。

3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组Ⅰ中，所述引物Ⅰ-F3、所述引物Ⅰ-B3、所述引物Ⅰ-FIP、所述引物Ⅰ-BIP、所述引物Ⅰ-LF和所述引物Ⅰ-LB的摩尔比为0.5：0.5：2：2：1：1；

所述引物组Ⅱ中，所述引物Ⅱ-F3、所述引物Ⅱ-B3、所述引物Ⅱ-FIP、所述引物Ⅱ-BIP、所述引物Ⅱ-LF和所述引物Ⅱ-LB的摩尔比为0.5：0.5：2：2：1：1。

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，各条引物单独包装。

6.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的工作程序为环介导等温扩增，反应条件为65℃恒温50min。

7.权利要求1所述引物组合在制备试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒的用途为如下（e1）或（e2）或（e3）：

（e1）制备用于检测导致犊牛腹泻的寄生虫牛艾美尔球虫和微小隐孢子虫的试剂盒；

（e2）鉴定导致犊牛腹泻的寄生虫牛艾美尔球虫和微小隐孢子虫；

（e3）检测待测样本中是否含有导致犊牛腹泻的寄生虫牛艾美尔球虫和微小隐孢子虫。

8.一种非诊断目的的检测待测寄生虫是否为牛艾美尔球虫和微小隐孢子虫的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测寄生虫的基因组DNA；

（2）以步骤（1）提取的基因组DNA为模板，分别采用权利要求1所述引物组合中的每个引物组进行环介导等温扩增，然后进行如下判断：

如果采用所述引物组Ⅰ可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增，待测寄生虫为或候选为牛艾美尔球虫；

如果采用所述引物组Ⅱ可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增，待测寄生虫为或候选为微小隐孢子虫。

9.一种非诊断目的的检测待测样本中是否含有寄生虫牛艾美尔球虫和微小隐孢子虫的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测样本的总DNA；

（2）以步骤（1）提取的总DNA为模板，分别采用权利要求1所述引物组合中的每个引物组进行环介导等温扩增，然后进行如下判断：

如果采用所述引物组Ⅰ可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增，待测样本中含有或疑似含有牛艾美尔球虫；

如果采用所述引物组Ⅱ可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增，待测样本中含有或疑似含有微小隐孢子虫。