[发明专利]用于检测导致犊牛腹泻的两种主要寄生虫的LAMP引物组合及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体公开了用于检测导致犊牛腹泻的两种主要寄生虫的LAMP引物组合及其应用。用于检测导致犊牛腹泻的牛艾美尔球虫和/或微小隐孢子虫的LAMP引物组合为引物组Ⅰ和/或引物组Ⅱ；所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ‑F3、引物Ⅰ‑B3、引物Ⅰ‑FIP、引物Ⅰ‑BIP、引物Ⅰ‑LF和引物Ⅰ‑LB组成，核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示；所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ‑F3、引物Ⅱ‑B3、引物Ⅱ‑FIP、引物Ⅱ‑BIP、引物Ⅱ‑LF和引物Ⅱ‑LB组成，核苷酸序列如SEQ ID NO.7～12所示。本发明提供的引物组合用于检测常见的导致犊牛腹泻的两种寄生虫，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明具有重大的推广价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及用于检测导致犊牛腹泻的两种主要寄生虫的LAMP引物组合及其应用。

背景技术

随着我国人民生活水平的提高，牛肉及牛奶的消费需求日益见长，促进了养牛业的发展，然而具有传染性的寄生虫病的爆发也呈上升趋势，且严重影响了牛的生长发育，给养殖户带来巨大的经济损失。造成严重后果的寄生虫主要为球虫和隐孢子虫。

牛球虫病可以感染各种品种的牛，尤其是2岁一下的犊牛发病率和死亡率最高，腹泻是该病的主要临床特征，且发病的牛感染的球虫数量越多，引起的症状就越严重。病原为艾美尔科、艾美尔属球虫。其中牛艾美尔球虫为我国最为常见的牛球种类，且致病性最强。隐孢子虫是一种重要的人兽共患原虫。其中微小隐孢子虫主要感染断奶前犊牛，且感染率高，几乎是感染断奶前犊牛的唯一虫种。寄生于小肠，引起犊牛水样腹泻、脱水甚至死亡。

目前关于对造成犊牛腹泻的寄生虫检测方法主要有以下几种：传统的球虫检测方法主要包括粪便样品的显微镜检查、饱和食盐水漂浮法和麦克马斯特法，后两种方法是最常用的球虫检测法。传统的隐孢子虫检测方法主要包括粪便样品的显微镜检查、水样的EPA1623检查。但传统的检测方法仍然存在耗时较长等缺陷。随着免疫学和现代分子生物学的不断发展，很多先进的检测技术如酶联免疫检测技术、免疫荧光技术、PCR、实时荧光定量PCR和环介导的等温扩增技术(LAMP)等不断涌现和应用于临床实践。

传统的基因鉴定方法为PCR法和DNA测序法，其中传统的PCR法检测周期较长，通常需要3-4个小时；Sanger DNA测序法对引物特异性要求较高，且价格较昂贵，后期数据分析较复杂，不适合临床推广使用。近年新发展起来的核酸等温扩增技术，无论是在反应时间还是仪器要求方面，都比PCR技术更有优势。在这些众多等温扩增技术中，又以环介导的等温扩增技术(LAMP)的应用最为成熟、最为广泛，其高灵敏度、高特异性、快速的扩增得到了市场的检验和认可。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测导致犊牛腹泻的两种主要寄生虫(牛艾美尔球虫和/或微小隐孢子虫)的LAMP引物组合及其应用。

本发明首先提供了用于检测导致犊牛腹泻的牛艾美尔球虫和/或微小隐孢子虫的LAMP引物组合，所述引物组合为引物组Ⅰ和/或引物组Ⅱ；

所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成，核苷酸序列如SEQ ID NO.1～6所示；

所述引物组Ⅱ由引物Ⅱ-F3、引物Ⅱ-B3、引物Ⅱ-FIP、引物Ⅱ-BIP、引物Ⅱ-LF和引物Ⅱ-LB组成，核苷酸序列如SEQ ID NO.7～12所示。