[发明专利]一步法检测三唑磷残留的ELISA试剂盒及其应用

权利要求书

1.抗三唑磷VHH-AP基因工程抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

2.一步法检测三唑磷残留的ELISA试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有三唑磷包被抗原，所述试剂包括权利要求1所述的抗三唑磷VHH-AP基因工程抗体、三唑磷标准溶液、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述三唑磷包被抗原制备方法如下：

（1）称7.4mg O-乙基-O-3-（1-苯基-1,2,4-三唑基）-N-（3-羧甲基）硫代磷酰胺酯、2.65mg NHS、4.8mg DCC溶于200μL无水DMF中，室温下搅拌反应过夜；将反应液离心，弃沉淀，上清液为活性酯；

（2）称20mg BSA溶于0.05mol/mL pH9.5的碳酸盐缓冲溶液2mL中，搅拌下逐滴加入150μL上述活性酯，20~30 min加完；然后室温下继续搅拌反应4~6 h；

（3）反应结束后，将反应液装入透析袋内用PBS液透析；每6h换液一次，共换液5-6次；透析后离心，弃沉淀，收集上清液，作为抗原包被液。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔酶标板，包被抗原的包被浓度为3.33 μg /mL。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗三唑磷VHH-AP基因工程抗体的浓度为1.00 μg /mL。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液由甘氨酸 7.51g、MgCl₂·6H₂O 0.203g、ZnCl₂ 0.136g、对硝基苯磷酸二钠1g和蒸馏水1000 mL配制而成，pH值10.4。

7.根据权利要求2-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述反应终止液为3M的氢氧化钠。

8.三唑磷ELISA检测试剂，其有效成分为权利要求1所述抗体。

9.权利要求2-7任一项所述试剂盒或权利要求8所述试剂在ELISA法检测样品中三唑磷残留中的应用。