[发明专利]口蹄疫病毒重组病毒样粒子及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201710646938.4 | 申请日： | 2017-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN107236747B | 公开（公告）日： | 2020-11-20 |
| 发明（设计）人： | 张晓战;张国栋;王楠;王飞;巴利民;李玲;肖进;齐鹏 | 申请（专利权）人： | 中牧实业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/42 | 分类号： | C12N15/42;C12N15/866;C12N15/66;C12N15/65;C12N7/04;A61K39/135;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京惟诚致远知识产权代理事务所(普通合伙) 11536 | 代理人： | 王慧凤;李巍 |
| 地址： | 100070 北京市丰台*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 口蹄疫病毒 重组 病毒 粒子 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种制备重组口蹄疫病毒样粒子的方法，包括以下步骤：
1）构建用于制备重组口蹄疫病毒样粒子的重组载体，包括下述步骤：
a将O型口蹄疫VP0基因插入到pFBDM载体的EcoR I和Xba I酶识别位点之间，得到插入了O型口蹄疫VP0基因的重组载体，命名为pFBDM-VP0；将O型口蹄疫VP1基因插入到pFBDM-VP0的Sma I和Kpn I酶识别位点之间，得到插入了O型口蹄疫VP0基因和O型口蹄疫VP1基因的重组载体，命名为pFBDM-VP0/VP1；
b．将绿色荧光蛋白EGFP基因插入到pFBDM载体的EcoR I和Xba I酶识别位点之间，得到插入了绿色荧光蛋白EGFP基因的重组载体，命名为pFBDM- EGFP；将O型口蹄疫VP3基因插入到pFBDM-EGFP的Sma I和Kpn I酶识别位点之间，得到插入了绿色荧光蛋白EGFP基因和O型口蹄疫VP3基因的重组载体，命名为pFBDM- EGFP/VP3；
c．将pFBDM-VP0/VP1质粒经Spe I/Nru I酶切得到的大片段，与经过Avr II/Pme I酶切的pFBDM-EGFP/VP3质粒产生的小片段连接，得到插入O型口蹄疫VP0、VP1基因、VP3基因和EGFP基因的重组质粒；其中，O型口蹄疫VP0基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示；O型口蹄疫VP1基因的核苷酸序列如序列表中序列2所示；O型口蹄疫VP3基因的核苷酸序列如序列表中序列3所示；绿色荧光蛋白EGFP基因的核苷酸序列如序列表中序列4所示；
2）将步骤1）构建的重组载体转化DH10 Bac感受态细胞，通过筛选鉴定，得到重组杆状病毒表达质粒；
3）步骤1）获得的重组杆状病毒表达质粒转染sf9细胞，经培养传代3次，细胞培养冻融处理3次，离心，过滤除菌后，获得重组杆状病毒样颗粒。
2.权利要求1所述的制备重组口蹄疫病毒样粒子的方法在制备预防和/或治疗口蹄疫感染的疫苗中的应用。
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