[发明专利]口蹄疫病毒重组病毒样粒子及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了口蹄疫病毒重组病毒样粒子及其制备方法和应用。所述重组口蹄疫病毒样粒子是由DNA分子组合物中的组分共同组装表达的。所述DNA分子组合物，包括O型口蹄疫VP0基因、O型口蹄疫VP1基因和O型口蹄疫VP3基因。更进一步的还包括绿色荧光蛋白基因。本发明以VP0、VP3和VP1自组装成FMDV VLPs的特性，改良了杆状病毒重组载体构建方法，并在载体中加入了绿色荧光蛋白标记，通过pFBDM Bac‑to‑Bac系统成功制备出FMDV VLPs，为进一步研制安全、有效的O型FMDV基因工程疫苗奠定了理论基础。

技术领域

本发明涉及口蹄疫病毒重组病毒样粒子及其制备方法和应用，属于基因工程疫苗领域。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth Disease,FMD)是由微RNA病毒科口蹄疫病毒属的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)所引起偶蹄动物以蹄、口、鼻等部位发生水疱为主要特征的一种急性、烈性传染病。该病对牛、猪、羊等主要畜种危害尤为严重，不仅能够引起感染动物的死亡，大大降低感染畜群的生产性能；还会对发生疫情的国家的国际动物及其制品贸易产生一定的负面影响，造成巨大的经济损失。国际动物卫生组织(OIE)将FMD列为法定上报的动物疫病首位，我国也将其列于一类动物传染病。我国是FMD疫区，该病已成为危害我国养殖业最严重的动物疫病之一。

FMDV在含有七种血清型，分别为A、O、C、Asia 1、SAT1、SAT2和SAT3。各个血清型FMDV生物学特性及发病特征相似，但各型间无交叉免疫反应。FMDV属于单股负链RNA病毒，基因组全长约8.5kb，含有一个ORF编码框，编码一个多聚蛋白。P1区结构蛋白在病毒自身蛋白酶3C的作用下裂解为VP0、VP3和VP1，该三种蛋白单体相互结合形成5S单体，并自动组装14S五聚体，12个五聚体进一步组装形成病毒衣壳。基因组RNA与病毒衣壳作用促使VP0自催化裂解为VP4和VP2蛋白，形成完整成熟的病毒粒子。

疫苗免疫是FMD的重要手段，其中，传统疫苗灭活疫苗在现阶段FMD防疫中发挥重要的作用。随着疫苗学和病毒结构生物学等领域的不断发展，新型疫苗开发研究是国内外一致关注的热点领域。病毒样颗粒(Virus Like Particles,VLPs)疫苗是由一种或多种病毒结构蛋白组装成的空衣壳结构，形态上与真正的病毒粒子相似。VLPs不含有病毒基因组，在宿主体内无法进行复制，不具有感染性。VLPs类似天然病毒粒子结构的特性，使其保留了大部分病毒的特异性抗原表位，也能够模拟病毒对宿主感染过程，有效的刺激机体产生高水平的免疫应答，是潜在安全的候选疫苗。目前，多种商品化VLPs疫苗应用于市场，如PCV-2，EV-71等。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种口蹄疫病毒样粒子的构建方法及其在制备疫苗中的应用。

基于上述发明目的，本发明提供了一种用于制备重组口蹄疫病毒样粒子的DNA分子组合物，包括O型口蹄疫VP0基因、O型口蹄疫VP1基因和O型口蹄疫VP3基因；其中，O型口蹄疫VP0基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示；O型口蹄疫VP1基因的核苷酸序列如序列表中序列2所示；O型口蹄疫VP3基因的核苷酸序列如序列表中序列3所示。

进一步的，所述的用于制备重组口蹄疫病毒样粒子的DNA分子组合物，由所述O型口蹄疫VP0基因、所述O型口蹄疫VP1基因和所述O型口蹄疫VP3基因和绿色荧光蛋白EGFP基因组成，其中，绿色荧光蛋白EGFP基因的核苷酸序列如序列表中序列4所示。

上述含有所述DNA分子组合物的表达盒、重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒也属于本发明的保护范围。

所述重组载体按照下述步骤构建：