[发明专利]口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法

权利要求书

1.口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S101先将口蹄疫病毒培养液离心至澄清，在无菌条件下加二氯甲烷，搅拌均匀，在低温下沉降，过夜，取上清液；

S102将上清液过第一中空纤维进行过滤，收集透过液；

S103将透过液过第二中空纤维进行过滤，所述第二中空纤维的孔径比所述第一中空纤维的孔径小，收集回收液；

S104将S103中收集的回收液进行层析；

S105按照浓度为7-15％的比例加入PEG，搅拌；

S106停止搅拌后静置；

S107提取上清液并弃去，将沉淀后的抗原搅拌均匀，在无菌条件下灌装至离心桶内，沉降离心；

S108弃去上清液，沉淀物用pH值为7.6±0.2的PBS缓冲液稀释，重悬；

S109重悬液用分散机充分匀浆；

S110纯化离心，收集上清液，上清液为纯化抗原；

S111纯化抗原用0.1μm或0.22μm孔径滤器过滤除菌；

其中， S101中在无菌条件下加入1-7％的二氯甲烷，搅拌均匀后，在2-8℃下沉降；所述第一中空纤维的孔径为0.1-0.5μm，所述第二中空纤维的孔径为100KDa-300KDa。

2.根据权利要求1所述的口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，S104中 层析为Sephawse6FF层析、Sephawse4FF层析、TOYOPEARL或TSKgel离子交换层析。

3.根据权利要求1所述的口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，S105中PEG为PEG-2000、PEG-4000、PEG-6000中的一种或几种。

4.根据权利要求1或3中所述的口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，S105中加入PEG的搅拌方式为：在连续搅拌的状态下加入PEG，在搅拌速度为100-200r/min的状态下持续搅拌4小时；

或者先加入PEG，然后在搅拌速度为100-200r/min的状态下持续搅拌4小时。

5.根据权利要求1所述的口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，S106中停止搅拌后静置4-20h，静置全过程中，抗原液温度保持在2-8℃。

6.根据权利要求1所述的口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，S107中在连续流离心机或者冷冻离心机中进行沉降离心，温度为2-8℃，在8000-10000r/min的速度下，离心15-20min。

7.根据权利要求1所述的口蹄疫抗原146S浓缩纯化方法，其特征在于，S109中重悬液用分散机充分匀浆，分散机转速为3000-6000r/min，7-15min；S110中采用连续流离心机或冷冻离心机纯化离心，离心机的转速为8000r/min，离心5-20min。