[发明专利]一种检测过氧化氢活性的荧光探针及制备和应用

权利要求书

1.一种检测过氧化氢活性的荧光探针化合物，其特征在于，化合物结构式如下：

。

2.根据权利要求1所述的化合物在检测溶液中过氧化氢浓度中的应用，其特征在于，通过以下步骤实现：将探针分子用二甲基亚砜溶解，制备储备液；取储备液，加入待检测体系中，使探针终浓度为10 微摩尔，室温孵育，一小时后在荧光光谱仪上测定体系荧光强度，进而确定待检测溶液中的过氧化氢浓度。

3.根据权利要求1所述的化合物在检测细胞或组织中过氧化氢活性中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）细胞中外源过氧化氢浓度的检测：体外培养EA.hy926细胞，接种于玻璃片上，待细胞密度达到70-80%后用于后续实验，细胞分别孵育5 μM，10 μM，20 μM的探针观测探针的有效工作浓度；给予50 μM,100 μM, 200 μM的过氧化氢处理，检测探针最低检测限；

（2）细胞中内源性过氧化氢浓度的检测：体外培养EA.hy926细胞，接种于玻璃片上，待细胞密度达到70-80%后用于后续实验，提前15分钟孵育探针，用无糖HBSS替换细胞培养液，并置于密封罐中，对细胞进行不同时间的缺糖缺氧应激损伤处理，通过共聚焦对探针的荧光进行成像，观察不同缺糖缺氧应激损伤时间下探针的响应性；

（3）小鼠大脑中脑动脉闭塞损伤后探针的响应性：小鼠给予MCAO模型处理，24小时后给予3%水合氯醛，取脑，在脑脊液、充氧条件下对脑组织进行切片处理，200微米厚度，切片后，在34摄氏度水浴条件下，放在脑脊液中孵育探针15分钟，利用Nikon A1R共聚焦显微镜对脑片拼图，观测全脑中探针的荧光。