[发明专利]一种富GSH-硒多形汉逊酵母的制备方法

说明书

本发明提供了一种富GSH‑硒多形汉逊酵母的制备方法。采用多形汉逊酵母进行发酵，在发酵前期加入亚硒酸钠，最终亚硒酸钠转化率高达97.28％，有机硒得到最大程度富集，得到了富GSH‑硒多形汉逊酵母。本发明具有成本低、产量高、易于放大培养等优点。

技术领域

本发明涉及生物发酵技术领域，特别涉及一种多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha，H.polymorpha)同时富集谷胱甘肽和有机硒(富GSH-硒)的方法。

背景技术

硒(Selenium)是人、动物以及植物体必不可少的微量元素之一，它对维持机体正常新陈代谢以及多种疾病的发生均相关。硒在人体以硒蛋白质的形式存在，是构成谷胱甘肽过氧化酶活性的中心，其药理作用是通过构建谷胱甘肽过氧化酶来发挥抗氧化作用。硒在人体内以共价键结合蛋白质，涉及硒蛋氨酸，硒半胱氨酸，人体缺硒会引发心血管病、糖尿病、心功能不全、头晕目眩和癌症等40多种疾病。目前，对于补硒的方法大多数是以无机硒的形态补充，但吸收率低，且对人体有一定的毒副作用，而有机硒对人体没有毒性，所以如何将无机硒转化为有机硒，使微量元素的利用率提高、毒性降低越来越受到国内外有关学者的关注。

目前，无机硒转化为有机硒的途径有动物转化法、植物自然转化法、微生物转化法等。动物转化法虽然能提高动物肉产品中的含硒量，但转化率、含量较低；植物转化法因长期施加硒肥，不仅成本高，而且容易造成环境污染；微生物转化法具有高吸收、天然安全、培养便利、各种条件易于控制、营养均衡的特点，可以作为将无机硒转化为有机硒的主要来源。

研究表明，不少微生物具有良好的富硒能力，如酵母同化无机硒后得到的总硒中97％是有机硒，并且有机硒比无机硒生物活性高，天然安全，适合人体吸收。

多形汉逊酵母(Hansenula Polymorpha，H.polymorpha)属于真菌门、酵母科、汉逊酵母属，为单细胞低等真核生物，多形汉逊酵母是一种耐热酵母，最高生长温度达49℃，最适温度为37～43℃。并且具有分裂速度快，生存力强，易于高密度发酵培养的优点，能在廉价的合成或半合成培养基上高密度生长。这不仅可以缩短发酵时间，而且降低了对发酵设备的制冷要求，从而极大地减少大规模培养成本和其发酵时受污染的风险。

谷胱甘肽(Glutathione，GSH)是一种由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成的活性三肽，几乎存在于生物体的所有细胞中。由于半胱氨酸上所具有的活性基团巯基可与重金属、碘乙酸等毒素相结合，使其具有整合解毒作用，即GSH具有广谱解毒作用；此外，GSH还具有抗氧化作用，达到延缓机体衰老的功效。因此，GSH在医药、保健食品和化妆品等行业有着广泛的应用。

目前，国内GSH的市场需求量日益增多，但我国GSH几乎完全依赖进口。GSH的生产方法有化学合成法、萃取法、酶法和发酵法。其中，发酵生产GSH因其产量高、生产成本低、易分离、无污染等优点，日益备受国内外学者关注。目前，用于发酵GSH最常用的菌株主要为酵母菌，其中GSH含量较高的为多形汉逊酵母属。

目前尚未见到发酵生产富GSH-硒酵母的方法报道。主要原因为：酵母富硒通常采用生物转化方式，由酵母将胞外亚硒酸钠转化为胞内的有机硒。但是，对于多形汉逊酵母而言，按照现有的亚硒酸钠的加入方式以及浓度，会抑制酵母菌体数量增加和胞内GSH合成。

发明内容

本发明的目的在于提供一种富GSH-硒多形汉逊酵母的制备方法，为富GSH-硒生物发酵的工业化生产提供实践依据。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

将多形汉逊酵母种子接种于发酵培养基中进行恒温发酵，恒温发酵过程中添加终浓度为20μg/mL～30μg/mL的亚硒酸钠；所述恒温发酵的条件包括：接种后，于36～37℃及100～120r/min条件下振荡培养46～50h；所述亚硒酸钠的加入时间为接种后10～12h。