[发明专利]一种用于富集、净化、检测AFB1

说明书

本发明公开了一种用于富集、净化、检测AFB₁的修饰反蛋白石光子晶体微球及其制备方法和应用；该修饰反蛋白石光子晶体微球可以有效地特异性富集、净化黄曲霉毒素；使用30ul修饰反蛋白石光子晶体微球作为免疫亲和材料，能够富集AFB1量最多达到50ng，标品的洗脱率能达到90％；同时本发明的制备方法简单方便，原料价格低廉，节约成本。通过该修饰反蛋白石光子晶体微球用于富集、净化、检测农产品中的AFB₁的方法富集毒素的效果好，同时能够节约装填柱子的过程，使得操作更简易方便。

技术领域

本发明涉及对农产品中的AFB₁的富集和检测。具体涉及一种用于富集检测 AFB₁的修饰反蛋白石光子晶体微球及其制备方法和应用

背景技术

农产品中的AFB₁(黄曲霉毒素)污染，成为影响食品安全，危害人们身体健康的巨型杀手。但长期以来，由于检测技术落后，制约着对农产品黄曲霉毒素污染的控制，也限制着我国农产品的出口。AFB₁是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)。AFB₁对哺乳动物毒性最大，会引起突变、致畸和肝损伤。黄曲霉毒素的检测有许多方法，主要方法有薄层色谱法、酶联免疫吸附测定法、高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法。黄曲霉毒素的检测通常采用HPLC，具有安全可靠、灵敏性好、准确度高、分辨率高等许多优点，被认为是最权威的检测黄曲霉毒素的方法，特别是反相高效液相色谱法。在HPLC检测黄曲霉毒素之前，样品需要进行前处理。前处理的方法通常采用免疫亲和柱净化样品。但是商业化的免疫亲和柱价格昂贵，同时装柱的过程复杂，填充材料为1mL柱容量一般在200ng。因此，开发一种价格相对低廉，减少装柱的过程，使得操作更简单，富集效果更好的富集净化黄曲霉毒素的材料具有重要意义。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明通过一种用于富集、净化、检测AFB₁的修饰反蛋白石光子晶体微球，该修饰反蛋白石光子晶体微球可以有效地特异性富集、净化黄曲霉毒素。

本发明的另一个目的是提供该用于富集、净化、检测AFB₁的修饰反蛋白石光子晶体微球的制备方法和应用。

技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述一种用于富集、净化、检测 AFB₁的修饰反蛋白石光子晶体微球，由反蛋白石光子晶体微球作为免疫亲和材料的载体，对微球进行羟基化修饰、氨基修饰和醛基修饰，再在微球表面修饰固定上AFB₁单克隆抗体。

本发明所述的修饰反蛋白石光子晶体微球的制备方法，包括如下步骤：

(1)反蛋白石光子晶体微球的制备：将二氧化硅和聚苯乙烯混合纳米乳液作为水相，将甲基硅油作为油相，使油相截断水相形成油包水型微球；将油包水型微球加热至水分蒸发完全，干燥固化；再清洗高温煅烧；降至室温，去除聚苯乙烯微球模板，留下有序的反蛋白石光子晶体微球；

(2)反蛋白石光子晶体微球表面的修饰：将步骤(1)得到的反蛋白石光子晶体微球通过进行表面羟基化修饰，再对微球表面进行氨基修饰，最后对微球表面进行醛基修饰；

(3)抗体的固定：通过化学键合方法将AFB₁单克隆抗体固定于经过步骤 (2)修饰得到的微球表面，得到修饰反蛋白石光子晶体微球。

作为优选，步骤(2)所述羟基化修饰为将反蛋白石光子晶体置于食人鱼溶液，室温震荡；清洗后烘干，使微球表面修饰上羟基。优选食人鱼溶液(浓硫酸: 双氧水(v:v)＝7:3)中，按10uL/每微球，振荡反应。

进一步地，步骤(2)所述氨基修饰为将羟基化修饰的反蛋白石光子晶体置于含APTMS的甲苯溶液，震荡后清洗，使微球表面修饰上氨基。优选将微球放入含体积分数5％APTMS的甲苯溶液中，按10uL/每微球，振荡反应。