[发明专利]一种单波长激发双信号增强的Hg2+荧光比率法

权利要求书

1.一种单波长激发双信号增强的Hg²⁺荧光比率法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、向含有Mg²⁺的Tris-HNO₃缓冲溶液中加入单链DNA分子A、单链DNA分子B、N-甲基卟啉二丙酸IX和4′,6-二脒基-2-苯基吲哚，得混合液Ⅰ，使混合液Ⅰ中DNA分子A的浓度为0.25-1.5µmol/L，DNA分子B的浓度为0.25-1.5µmol/L，N-甲基卟啉二丙酸 IX的浓度为0.25-0.75µmol/L，4′,6-二脒基-2-苯基吲哚的浓度为0.05-0.5µmol/L；其中，单链DNA分子A由部分Ⅰ和部分Ⅱ两部分组成，单链DNA分子B由部分Ⅲ和部分Ⅳ两部分组成，所述单链DNA分子A的部分Ⅰ和单链DNA分子B的部分Ⅲ是含有T-T碱基错配的部分互补序列，所述单链DNA分子A的部分Ⅱ和单链DNA分子B的部分Ⅳ是能形成G-四链体的富G序列；

所述含有Mg²⁺的Tris-HNO₃缓冲溶液的pH为7-8；

步骤二、向混合液Ⅰ中加入含有Hg²⁺的样品，得混合液Ⅱ；

步骤三、将混合液Ⅱ在22-25℃条件下振荡25-30 min，随即对混合液Ⅱ进行荧光强度测定；其中，测量范围为400-700 nm，激发波长为380 nm，荧光激发狭缝宽度为10nm，荧光发射狭缝宽度为10 nm ，扫描速度为240 nm/min。

2.如权利要求1所述的荧光比率法，其特征在于：对混合液Ⅱ进行荧光强度测定时，测量455nm和610nm处的荧光强度，然后计算两波长处荧光强度的比值。

3.如权利要求1所述的荧光比率法，其特征在于：所述Tris-HNO₃缓冲溶液的浓度为10mmol/L，pH值为7.4，其中含有的Mg²⁺的浓度为20mmol/L。

4.如权利要求1所述的荧光比率法，其特征在于：所述混合液Ⅰ中，单链DNA分子A和单链DNA分子B的浓度比为1:1。

5.如权利要求1所述的荧光比率法，其特征在于：所述混合液Ⅱ中，Hg²⁺的浓度为0.05 -3.0 µmol/L。

6.如权利要求1-5任意一种所述的荧光比率法，其特征在于：混合液Ⅰ中，单链DNA分子A和单链DNA分子B的浓度均为0.5 μmol/L，N-甲基卟啉二丙酸IX的浓度为0.5 μmol/L，4′,6-二脒基-2-苯基吲哚的浓度为0.2 μmol/L；混合液Ⅱ中，Hg²⁺的浓度为2 µmol/L。