[发明专利]一种水溶性胶原的提取方法

权利要求书

1.一种水溶性胶原的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

先对富含III型胶原的组织进行切片；再将切片组织清洗浸泡在0.1%~40%(W/V)的碱溶液中，浸泡0.5~24h；清洗至PH为5~8后生理盐水浸泡约0.5~48h，沥去多余水分，2~8℃组织捣碎后分散进酶解液中，2~40℃环境酶解1~72h；酶解完毕后碱液调PH值至7~13，2~40℃静置2~24h；30~150目滤网过滤，去除未酶解物；20%-50%(W/V)盐溶液盐析，收集固形物，截留分子量为4000~8000的透析袋透析，去除多余离子和杂质，获得多型胶原，最后将多型胶原混合物分散至水中，酸液调PH值至1~5，30~150目滤网过滤，去除析出物，将滤液盐析后透析，得目的胶原。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述富含III型胶原的组织为海参、小牛皮、胎牛皮、小猪皮、胎猪皮的一种或几种；小牛皮、小猪皮动物年龄在0~3个月。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浸泡用碱溶液的质量分数为0.1%~40%(W/V)。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浸泡用碱溶液的溶质为氢氧化钠、碳酸氢钠、柠檬酸钠中的一种或几种；PH为8~14。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生理盐水溶质为氯化钠，浓度为0.7~0.9%。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解液为酸性蛋白酶，效价为1:1500~1:12000，酸性蛋白酶：组织切片为1:50~1:1000(W/W);酶解液PH值为2~6。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述盐析用盐溶液的溶质为氯化钠、硫酸钠、硫酸铵、氯化钾、氯化钙中的一种或几种，浓度为20%~50%(W/V)。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述首次盐析前待盐析物的PH为7~13，再次盐析前盐析物的PH为1~5；调PH所用碱液为氢氧化钠溶液、碳酸氢钠溶液、柠檬酸钠溶液中的一种或几种；调PH所用酸液为盐酸溶液、柠檬酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液、醋酸溶液的一种或几种，碱液浓度为0.01~5mol/L, 酸液浓度为0.01~10mol/L。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在对动物组织进行胶原提取之前，先对所述组织进行预处理；所述预处理为用水对组织进行反复冲洗，之后切片，再用质量分数为0.05%~20%醋酸氯己定溶液浸泡0.5~24h，再用水反复冲洗。