[发明专利]一种烟草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的方法有效
| 申请号： | 201710673926.0 | 申请日： | 2017-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN107306796B | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 王珊珊;杨军;王中;谢小东;李锋;武明珠;赵影影 | 申请（专利权）人： | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 郑州中民专利代理有限公司 41110 | 代理人： | 姜振东 |
| 地址： | 450001 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 烟草 玻璃化 组织 不定 方法 | ||
1.一种烟草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1) 烟草玻璃化愈伤组织和不定芽处理：当正常培养的分化培养基上出现玻璃化的烟草愈伤组织或不定芽时，在超净台内将玻璃化部分与正常组织分离开来，如果玻璃化愈伤组织体积较大，应用无菌镊子分成适宜大小，并从培养基上取出，转移至灭菌的空置的干燥组培瓶内，密封瓶口；置于正常光照培养箱中1-7天，直至玻璃化组织恢复正常状态，期间若组培瓶内水分过多，可以更换组培瓶；
（2）处理后的愈伤组织及不定芽培养：将步骤（1）处理后恢复正常状态的烟草愈伤组织或不定芽在超净台内转移至分化培养基或伸长，培养基上继代培养，5-8天后，原玻璃化烟草愈伤组织或不定芽即可正常分化或伸长；
（3）如果经过步骤（2）培养处理的去玻璃化烟草愈伤组织和不定芽在继代培养过程再次出现玻璃化迹象，重复步骤（1）和（2）；
所述正常光照培养箱的条件为：相对湿度60%，光照16 h/28 ℃，黑暗8 h/25℃，光强4Lx；
所述分化培养基成分：4.4g/L MS无机盐即Sigma的MS基础培养基，30g/L蔗糖，1.0 mg/L 6-BA，0.1 mg/L NAA，2.5 g/L 植物凝胶，余量为水，pH 5.8-5.9；
所述伸长培养基成分：4.4g/L MS无机盐即Sigma的MS基础培养基，30g/L蔗糖，0.1 μg/mL 6-BA，2.5 g/L 植物凝胶，余量为水，pH 5.8-5.9。
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