[发明专利]一种用于肿瘤诊断与预后检测的分子标志物及其检测引物和试剂盒

说明书

本发明公开一种用于肿瘤诊断与预后检测的分子标志物，所述分子标志物为PRSS3剪接变异体；其中，所述PRSS3剪接变异体为PRSS3‑V1、PRSS3‑V2、PRSS3‑V3和/或PRSS3‑V4，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1‑4所示。本发明进一步提供了用于检测上述分子标记物的RT‑qPCR引物和试剂盒。本发明用于检测PRSS3剪接变异体的引物或试剂盒可以特异地检测细胞、组织、体液及分泌液等样本中PRSS3剪接变异体转录水平，通过本发明得到的检测结果可以为患者肿瘤个体化诊断及药物治疗的预后判断提供评价方法。此外，本发明检测方法操作简便、精准稳定，具有临床应用意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。更具体地，涉及一种用于肿瘤诊断与预后检测的分子标志物及其检测引物和试剂盒。

背景技术

癌症是全球疾病致死的主要原因之一。由于缺乏相对特异的标志物，或敏感性低组织特异性差，多数患者就诊时已届晚期，并由于监测治疗干预手段的限制，致使死亡率极高。尽管越来越多的证据表明肿瘤中许多基因存在表达差异，但仍未发现可靠的生物标志物来用于肿瘤的精确诊断及监测。

因此，筛选敏感性强特异性高的分子标志物，以及建立有效监控手段和建立精准的检测方法，对肿瘤诊断和预后检测具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种用于肿瘤诊断与预后检测的分子标志物。

本发明的第二个目的在于提供上述分子标记物在制备肿瘤或感染等疾病诊断与预后检测的试剂中的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种用于肿瘤或感染等疾病诊断与预后检测的试剂盒。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

本发明研究发现PRSS3基因在mRNA转录之后、翻译之前经不同的剪接模式所产生了不同剪接变异体，这些剪接变异体的表达具有组织特异性，且在环境刺激、药物作用下或肿瘤发生发展过程中，会发生转录水平改变，从而产生差异表达剪接变异体不同类型呈现组织细胞特异性表达。剪接变异体的特异性表达的变化与肿瘤或感染性疾病关系密切。因此，可将这些可作为肿瘤或炎症感染诊断与预后检测的分子标记物。

基于以上发现，本发明首先提供了一种用于肿瘤诊断与预后检测的分子标志物，所述分子标志物为PRSS3剪接变异体；其中所述PRSS3剪接变异体为PRSS3-V1、PRSS3-V2、PRSS3-V3和/或PRSS3-V4，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1-4所示。

本发明提供了上述分子标记物在制备肿瘤诊断与预后检测的制剂的应用。

本发明还提供了检测上述分子标记物的物质在制备肿瘤诊断与预后检测的制剂中的应用。

优选的，所述物质为检测上述分子标记物的引物，以及包含上述引物的试剂或试剂盒。

本发明进一步提供了一种用于检测上述分子标记物的RT-qPCR引物，包括用于检测PRSS3-V1、PRSS3-V2、PRSS3-V3和PRSS3-V4的通用引物Vc1或Vc2；

其中，所述引物Vc1的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述引物Vc2的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；优选的，所述通用引物为引物Vc1。

本发明通过上述通用引物Vc1或Vc2是针对PRSS3剪接变异体PRSS3-V1、PRSS3-V2、PRSS3-V3和PRSS3-V4共有序列(如SEQ ID No.5所示)设计的，通过PCR扩增可检测或筛选样本中是否存在PRSS3剪接变异体，以利于进一步确定PRSS3剪接变异体的类型。因此可以进行细胞、组织、体液及分泌液等样本中是否存在PRSS3剪接变异体的筛查。