[发明专利]采用大肠埃希氏菌JL-HYP发酵生产羟脯氨酸的方法

权利要求书

1.采用大肠埃希氏菌JL-HYP发酵生产羟脯氨酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、大肠埃希氏菌JL-HYP菌株经斜面活化，生化培养箱37℃培养20h，再经梯度稀释，涂布于LB培养基上，培养后，挑取单个菌落分别接种到LB斜面培养基上，置于生化培养箱30-36℃培养12h；从LB斜面培养基上挑取单个菌落接种到装有种子培养基的种子瓶中培养，培养条件：温度30-36℃、摇床转速200rpm、培养时间6-8 h；当OD值长到1.0-2.0时，得到种子液，备用；

步骤二、将种子液接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行培养30-45h，得到含有羟脯氨酸的发酵液；接种量：5-15%；培养条件：初始发酵温度32-38℃，空气流量5-50L/min和搅拌速度200-800r/min使溶氧维持在10-40%，发酵pH值控制在7.0-7.2之间；

步骤三、提取含有羟脯氨酸的发酵液中的羟脯氨酸：将发酵液加热到40-60℃，用2mo1/L盐酸调节pH至2-5，过30nm陶瓷膜微滤，纯化水清洗2-3次；将上清液过强酸性阳离子交换柱，条件为：静态吸附，按20%体积比加入阳离子树脂，搅拌吸附1h；动态吸附，按15%体积装柱树脂，流速按2BV/h进料，末期用0.5-1BV水冲柱；收集上清液；在上清液中按其体积0.5-1%的量加入活性炭，60℃脱色0.5-2h，过滤除炭；收集得到羟脯氨酸上清液进行真空浓缩，得到羟脯氨酸；

所述大肠埃希氏菌JL-HYP，分类命名为大肠埃希氏菌（Escherichia coli ），已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），菌种保藏编号为CGMCCNO.13922，保藏日期为2017年3月23日。

2.如权利要求1所述大肠埃希氏菌JL-HYP发酵生产羟脯氨酸的方法，其特征在于：所述种子培养基包括葡萄糖20-30g/L，K₂HPO₄10-20g/L, MgSO₄·7H₂O 0.5-3.0g/L，KH₂PO₄ 10-20g/L，酵母粉0.5-5.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 5-10.0g/L，微量元素储备液5-10.0mL/L，余量为水，pH 6-7；所述微量元素储备液中包含FeSO₄ 1.0-3.0g/L，MnSO₄ 0.2-1.0g/L和ZnSO₄ 0.2-1.0g/L 。

3.如权利要求1所述大肠埃希氏菌JL-HYP发酵生产羟脯氨酸的方法，其特征在于：所述发酵培养基中包含葡萄糖20-30g/L，K₂HPO₄10-20g/L, MgSO₄·7H₂O 0.5-3.0g/L，酵母粉0.5-3.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 5-10.0g/L，微量元素储备液5-10.0mL/L，余量为水， pH 6-8；所述微量元素储备液中包含FeSO₄ 1.0-3.0g/L，MnSO₄ 0.2-1.0g/L和ZnSO₄ 0.2-1.0g/L。

4.如权利要求1-3其中之一所述大肠埃希氏菌JL-HYP发酵生产羟脯氨酸的方法，其特征在于：所述真空浓缩的条件为真空度-0.1MPa，旋转速度100-200rpm，温度50℃-80℃。