[发明专利]一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的ISSR分子标记方法有效
| 申请号： | 201710689991.2 | 申请日： | 2017-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN107354217B | 公开（公告）日： | 2020-11-10 |
| 发明（设计）人： | 田慧;封毅;周敏;高慧新 | 申请（专利权）人： | 广西中医药大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南宁新途专利代理事务所(普通合伙) 45119 | 代理人： | 周善勇 |
| 地址： | 530001 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 白花蛇舌草 遗传 多样性 分析 issr 分子 标记 方法 | ||
1.一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的ISSR分子标记引物体系，其特征在于：所述引物体系的引物为121号、156号、157号和160号引物；其中，
121号引物的核苷酸序列为ACACACACACACTC，如SED ID No.1所示；
156号引物的核苷酸序列为ACACACACACACCT，如SED ID No.2所示；
157号引物的核苷酸序列为ACACACACACACCG，如SED ID No.3所示；
160号引物的核苷酸序列为GATGATGATGATGC，如SED ID No.4所示。
2.一种利用权利要求1所述引物体系分析白花蛇舌草遗传多样性的方法，其特征在于，具体步骤为：
（1）提取白花蛇舌草的基因组DNA，利用ISSR-PCR反应扩增所述白花蛇舌草基因组DNA；
（2）对步骤（1）所述PCR扩增得到的PCR产物进行电泳、显色，显色结束后，拍照获取谱带信息并保存；
对步骤（2）所获得的谱带信息进行分析，同一位点有相同的扩增条带记为“1”，无则记为“0”，从而得到“1”、“0”矩阵图；采用分析软件分别计算出遗传多样性参数有效等位基因Ne、等位基因数Na、Shannon’s信息指数、Nei’s基因多样性指数,以及遗传分化指标居群内基因多样性Hs、居群总基因多样度Ht、居群间遗传分化系数Gst以及基因流Nm，再利用相关软件获得聚类分析图。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中 ISSR-PCR反应体系及程序为：20μL体系：2×Taq PCR Mastermix 10.0μL、引物1.0μL、模板DNA 1.0μL、ddH2O 8.0μL；扩增程序为：95℃预变性5min，95℃变性30s，退火30s，退火温度由不同引物的Tm决定，72℃延伸2min，30个循环，72℃延伸5min,4℃保存。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（2）所述的电泳为1.2%的琼脂糖凝胶电泳，电压75V，电泳时间50min，用D2000 DNA Marker作为标准参照。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述退火温度设定比引物Tm低5℃。
6.权利要求1所述的引物体系在辅助鉴定白花蛇舌草中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广西中医药大学，未经广西中医药大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710689991.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
