[发明专利]一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的ISSR分子标记方法

说明书

本发明提供一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的ISSR分子标记方法，属于分子生物学技术领域。该方法选用四条背景清晰、扩增效果好和多态性高的引物，利用ISSR‑PCR反应扩增所述白花蛇舌草基因组DNA，根据ISSR‑PCR结果，分析条带，建立白花蛇舌草的DNA指纹图谱，构建白花蛇舌草的遗传资源数据库。本发明为白花蛇舌草品种鉴定以及遗传多样性分析建立了新的方法，有效解决前人在遗传标记数据库构建中，库的代表性差的问题；也解决了已有标记技术在白花蛇舌草遗传资源方面的不足，具有多态性高、重复性好、费用低、检测程序简单和不受环境影响的优点。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，具体涉及一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的ISSR分子标记方法。

背景技术

白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.为壮族民间常用中草药，为一年生草本，叶对生，无柄；花单生或双生于叶腋，花梗略粗壮，4数；蒴果膜质，扁球形；广泛分布于我国长江以南地区，多见于水田等湿润的旷地。白花蛇舌草具有清热解毒、活血化瘀、利水渗湿、消肿止痛的功效，内服多用于治疗肿瘤、蛇咬伤、小儿疳积；外用主治泡疮、刀伤、跌打等症。

白花蛇舌草种质资源在DNA分子水平上存在极其丰富的遗传多样性。充分了解白花蛇舌草种质资源的遗传多样性与谱系关系是种质创新与遗传育种的基本要求和前提。目前对白花蛇舌草的研究多集中在形态学、化学、药理学；分子方面，有学者对白花蛇舌草进行了DNA提取的考察，还有学者利用RAPD、AFLP、ITS序列对白花蛇舌草进行研究。

ISSR 分子标记是在SSR 标记基础上发展起来的一种新技术,其基本原理是在SSR的5’或3’端加锚1-4个嘌呤或嘧啶碱基，然后以此为引物，对两侧具有反向排列SSR 的一段基因组DNA序列进行扩增。ISSR兼具SSR、RAPD、RFLP、AFLP 等分子标记的优点，与SSR相比，ISSR不需要预先获知序列信息而使成本降低，且多态性更丰富；与RAPD 相比，ISSR 重复性高，稳定性好，同时具备RAPD 的简便、易操作等特点。目前，还未有学者利用ISSR分子标记对白花蛇舌草的遗传多样性研究。

发明内容

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的ISSR分子标记方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的ISSR分子标记引物体系，所述引物体系的引物为121号、156号、157号和160号引物；其中，

121号引物的核苷酸序列为ACACACACACACTC，如SED ID No.1所示；

156号引物的核苷酸序列为ACACACACACACCT，如SED ID No.2所示；

157号引物的核苷酸序列为ACACACACACACCG，如SED ID No.3所示；

160号引物的核苷酸序列为GATGATGATGATGC，如SED ID No.4所示。

优选地，利用上述引物体系分析白花蛇舌草遗传多样性的方法，具体步骤为：

（1）提取白花蛇舌草的基因组DNA，利用ISSR-PCR反应扩增所述白花蛇舌草的基因组DNA；

（2）对步骤（1）所述PCR扩增得到的PCR产物进行电泳、显色，显色结束后，拍照获取谱带信息并保存；