[发明专利]一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法

权利要求书

1.一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)样品的前处理

1.1)将抗癌类海洋中药的样品置于超低温冰箱冷冻过夜，取出置于冷冻干燥机中以-90℃低温干燥48h，用中药粉碎机粉碎，过100目筛，混合均匀，得到样品粉末，备用；

1.2)准确称取1.0000g样品粉末于50mL离心管中，加入5～30mgmg蛋白酶XIV和10.0mL超纯水，旋涡混匀，加盖密封，37℃下超声2～14min；

1.3)将样品提取液以4000r/min离心20min，取上清液过0.45μm的水系微孔滤膜，得到样品待测提取液；

(2)上机测定，将所得的样品待测提取液通过高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱联用方法测定样品中的硒形态，该联用方法所用的标准溶液为：

含硒代胱氨酸(GBW-10087)、甲基-硒代半胱氨酸(GBW-10088)、亚硒酸根(GBW-10032)、硒代蛋氨酸(GBW-10034)的储备标准溶液，用0.1mol/L的盐酸逐级稀释成0ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、60ng/mL、80ng/mL的标准使用液，4℃保存；

(3)结果计算：根据所测得的色谱图对硒的4种形态进行定性和定量的计算，在优化好的色谱条件下，四种硒形态的出峰顺序依次为硒代胱氨酸，甲基-硒代半胱氨酸，亚硒酸盐，硒代蛋氨酸；以色谱峰的保留时间来定性；用峰面积外标法来定量各硒形态，公式如下：

X＝C×V×F/m

式中：X—样品中待测物质的含量，μg/kg；

C—待测液中该物质的含量，μg/L；

V—测定液体总体积，mL；

F—稀释倍数；

m—称样质量，g。

2.根据权利要求1所述的一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，其特征在于：所述的步骤(2)所用仪器检测条件如下：

其中高效液相色谱的参数为：

色谱柱Hamilton PRP-X100阴离子交换柱，250mm×4.1mm,10μm

流动相 5mmol/L的柠檬酸，其pH为4.5

流速 1.0mL/min

注入量 100μL

其中氢化物发生的参数为：

还原剂 含有0.5％(w/v)氢氧化钠的2.5％(w/v)硼氢化钾溶液

HCl 5％体积浓度

泵速 40r/min

UV 打开

原子荧光光谱的测试参数为：

灯电流 90mA

负电压 300V

载气流速 400mL/min

屏蔽气流速 800mL/min。

3.根据权利要求2所述的一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，其特征在于：所述的流动相用50％NH₃·H₂O调节，使用前经0.45μm的水系微孔滤膜过滤并超声脱气。

4.根据权利要求3所述的一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，其特征在于：流动相的浓度为2mmol/L～8mmol/L，pH为3.0～6.0。

5.根据权利要求4所述的一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，其特征在于：蛋白酶XIV的质量为5～30mg，超声酶解时间为2min～14min。

6.根据权利要求1所述的一种抗癌类海洋中药中硒形态的检测方法，其特征在于：所述的抗癌类海洋中药为牡蛎、文蛤、青蛤和海参。