[发明专利]用于检测沙门氏菌的引物系统和试剂盒以及他们的应用和检测沙门氏菌的方法在审
| 申请号： | 201710690828.8 | 申请日： | 2017-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN109402271A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 王超;冯婕;杜晓辰 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 乔雪微;严政 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 沙门氏菌 引物系统 试剂盒 检测 反应缓冲液 钙黄绿素 硫酸镁 氯化锰 甜菜碱 反应体系颜色 沙门氏菌基因 应用 微生物检测 变化判断 接触反应 现场检测 精准度 灵敏度 | ||
1.一种用于检测沙门氏菌的引物系统，其特征在于，该引物系统包括如SEQ ID No：1所示的正向外引物、如SEQ ID No：2所示的反向外引物、如SEQ ID No：3所示的正向内引物和如SEQ ID No：4所示的反向内引物。
2.根据权利要求1所述的引物系统，其中，外引物与内引物的摩尔比为1:4-12，优选为1:6-10。
3.根据权利要求1或2所述的引物系统，其中，所述引物系统还包括环引物，所述环引物为如SEQ ID No：5所示的引物序列和/或如SEQ ID No：6所示的引物序列；
优选的，外引物与环引物的摩尔比为1：1-5。
4.一种用于检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：权利要求1-3中任意一项所述的引物系统、dNTP、甜菜碱、硫酸镁、氯化锰、钙黄绿素、反应缓冲液以及DNA聚合酶。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述反应缓冲液为Thermpol缓冲液。
7.权利要求1-3中任意一项所述的引物系统以及权利要求4-6中任意一项所述的试剂盒在检测沙门氏菌中的应用。
8.一种检测沙门氏菌的方法，其特征在于，该方法包括：将权利要求1-3中任意一项所述的引物系统、甜菜碱、硫酸镁、氯化锰、钙黄绿素、dNTP、DNA聚合酶以及反应缓冲液与DNA模板在60-65℃的条件下接触反应，并通过反应体系的颜色变化判断DNA模板中沙门氏菌基因的存在。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，基于100微升的反应体系，权利要求1-3中任意一项所述的引物系统的用量为4×10-4-6×10-4微摩尔，甜菜碱的用量为60-100微摩尔，硫酸镁的用量为0.3-0.9微摩尔，氯化锰的用量为0.01-0.1微摩尔，钙黄绿素的用量为5×10-4-5×10-3微摩尔，dNTP的用量为0.1-0.2微摩尔，DNA聚合酶的用量为2-6U，反应缓冲液的用量为8-12微升，DNA模板的用量为60-100纳克；
优选的，所述钙黄绿素与氯化锰的用量摩尔比为1:5-30。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，如果DNA模板中存在沙门氏菌基因组，则反应体系颜色有褐色变为荧光绿；如果DNA模板中不存在沙门氏菌基因组，则样品体系无颜色变化或不变为荧光绿。
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