[发明专利]用于检测沙门氏菌的引物系统和试剂盒以及他们的应用和检测沙门氏菌的方法

说明书

本发明涉及微生物检测领域，具体涉及用于检测沙门氏菌的引物系统和试剂盒以及他们的应用和检测沙门氏菌的方法。引物系统包括SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示序列。试剂盒包括：引物系统、dNTP、甜菜碱、硫酸镁、氯化锰、钙黄绿素、反应缓冲液及DNA聚合酶。还公开了引物系统及试剂盒在检测沙门氏菌中的应用。检测方法包括：将引物系统、甜菜碱、硫酸镁、氯化锰、钙黄绿素、dNTP、DNA聚合酶及反应缓冲液与DNA模板在60‑65℃接触反应，并通过反应体系颜色变化判断沙门氏菌基因的存在。本发明提供的引物系统和试剂盒能对沙门氏菌现场检测，快速有效，灵敏度和精准度较高。

技术领域

本发明涉及微生物检测领域，具体涉及一种用于检测沙门氏菌的引物系统和试剂盒以及他们在检测沙门氏菌中应用和一种检测沙门氏菌的方法。

背景技术

食源性致病菌，指在食品的加工和流通过程中引入的病原菌，这些病原菌在食品中存活、生长代谢引起食物的变质和破坏，同时有些病原菌分泌有毒物质，直接或间接导致人患病。常见细菌性食物中毒的病原微生物为沙门氏菌属(Salmonella)，其是一大群寄生于人类和动物肠道内，生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。沙门氏菌不产生外毒素，但菌体裂解时。可产生毒性很强的内毒素，此种毒素为致病的主要因素，可引起人体发冷、发热及白细胞减少等病症。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。

目前，国内对食源性病原菌导致的疾病快速诊断技术的研究还处于初级阶段，常用的鉴定方法主要有PCR法或是利用免疫学的方法，但这些方法均费时费力，有的还不准确，甚至需要专业技术人员或专业技术设备，难以对病原生物早期监控、定期检测、现场快速诊断，因此往往是爆发了大规模流行性疾病后才引起关注和重视。国内外尚无针对沙门氏菌的快速有效的易于现场操作的检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的如上问题，提供一种检测沙门氏菌的引物系统和试剂盒，使用本发明提供的引物系统和试剂盒能够对沙门氏菌进行现场检测，且快速有效，灵敏度和精准度也较高。

为了实现上述目的，本发明一方面提供一种用于检测沙门氏菌的引物系统，其中，该引物系统包括如SEQ ID No：1所示的正向外引物、如SEQ ID No：2所示的反向外引物、如SEQ ID No：3所示的正向内引物和如SEQ ID No：4所示的反向内引物。

优选地，所述引物系统还包括环引物，所述环引物为如SEQ ID No：5 所示的引物序列和/或如SEQ ID No：6所示的引物序列。

本发明第二方面提供一种用于检测沙门氏菌的试剂盒，其中，该试剂盒包括：如上所述的引物系统、dNTP、甜菜碱、硫酸镁、氯化锰、钙黄绿素、反应缓冲液以及DNA聚合酶。

优选的，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。

优选的，所述反应缓冲液为10×Thermpol缓冲液。

本发明第二方面提供一种检测沙门氏菌的方法，其中，该方法包括：将如上所述的引物系统、甜菜碱、硫酸镁、氯化锰、钙黄绿素、dNTP、DNA 聚合酶以及反应缓冲液与DNA模板在60-65℃的条件下接触反应，并通过反应体系的颜色变化判断DNA模板中沙门氏菌基因的存在。

通过本发明的技术方案，可以取得如下效果：

1)本发明通过4条引物与靶序列上的6个特异部位准确结合来产生扩增反应，因此可以获得比常规PCR更高的特异性；

2)反应结果检测方便、快捷，可直接观察反应体系的颜色变化来判定，反应体系由浅褐色变为荧光绿即为阳性结果；