[发明专利]一种促使重楼种子快速萌发成苗的方法

权利要求书

1.一种促使重楼种子快速萌发成苗的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)对采摘的重楼种子进行预处理：将采摘的成熟的重楼种子除去外种皮，冲洗干净后将种子放在室内阴干，然后放置于0～4℃下备用；

(2)检查间歇浸没式生物反应器的密闭性，然后对间歇浸没式生物反应器进行灭菌处理；

(3)取步骤(1)中的重楼种子，先用水浸泡过夜，使种子充分吸胀变得圆润饱满，然后在无菌条件下为种子灭菌，并确认灭菌彻底，无染菌现象；

(4)培养萌发：将上步骤中灭菌完全的种子置于间歇浸没式生物反应器内进行培养，在间歇浸没式生物反应器中加入灭菌蒸馏水，每升灭菌蒸馏水中含有100μmol的硝普钠，每个间歇浸没式生物反应器中接种350～500粒重楼种子，间歇浸没式生物反应器中重楼种子的浸没频率为3～5分钟/6h，在阴暗环境下进行培养，培养过程中记录种子胚根突破的最初时间，并定期统计种子的萌发率，以及种子的胚根长度≥3cm的百分率。

2.根据权利要求1所述的促使重楼种子快速萌发成苗的方法，其特征在于：步骤(1)中去除重楼外种皮的过程中，不能使种子表面破损，并且外种皮去除后，将重楼种子用清水冲洗2～5次，彻底去除外种皮残留物；同时种子冲洗干净后切忌暴晒和烘干，以免影响种子的萌发率。

3.根据权利要求1所述的促使重楼种子快速萌发成苗的方法，其特征在于：步骤(2)中检查密闭性的方法如下：在间歇浸没式生物反应器内装入1L清水，观察它的密闭性并将加入清水的间歇浸没式生物反应器接到泵上，观察过滤嘴是否倒流。

4.根据权利要求1所述的促使重楼种子快速萌发成苗的方法，其特征在于：步骤(2)中灭菌的方法如下：将清洗干净的间歇浸没式生物反应器放入到高压灭菌锅内灭菌，等其冷却后用纸张包起来，进行再次灭菌，纸张包裹反应器的时候先包住上层，用棉线锁紧，再包底座，用第二条棉线继续锁紧，将尖锐的部分用透明胶粘住，底座需全部用胶带粘上，防止灭菌后尖锐物体戳破底座。

5.根据权利要求1所述的促使重楼种子快速萌发成苗的方法，其特征在于：步骤(3)中为种子灭菌的方法如下：在超净工作台内，用无菌水清洗种子3～5次，然后使用体积浓度75％的酒精消毒30～45s，消毒后立即用无菌水清洗3～5次，再使用为质量浓度0.1～0.2％的升汞浸泡10～15分钟，再用无菌水清洗5次；

将培养皿进行灭菌处理，灭菌后在培养皿底部铺2层滤纸，并在培养皿中滴加无菌水至刚好湿润滤纸；将灭菌后的种子分装入培养皿内进行培养，先小份单独培养5天，观察种子是否灭菌彻底，随后将未出现染菌的种子移入间歇浸没式生物反应器。

6.根据权利要求1所述的促使重楼种子快速萌发成苗的方法，其特征在于：步骤(4)中，将灭菌彻底的种子移入间歇浸没式生物反应器中时，需在超净工作台操作，并且用酒精灯将间歇浸没式生物反应器的盖子四周灭菌后，方可打开反应器盖子。

7.根据权利要求1所述的促使重楼种子快速萌发成苗的方法，其特征在于：步骤(4)中，每个间歇浸没式生物反应器中加入1L灭菌蒸馏水，且每升灭菌蒸馏水中含有150mg的卡那霉素和50mg的纳他霉素。