[发明专利]一种促使重楼种子快速萌发成苗的方法

说明书

本发明提供了一种促使重楼种子快速萌发成苗的方法，包括以下步骤：对采摘的重楼种子进行预处理；检查间歇浸没式生物反应器的密闭性，然后对间歇浸没式生物反应器进行灭菌处理；取预处理后的重楼种子，先用水浸泡过夜，使种子充分吸胀变得圆润饱满，然后在无菌条件下为种子灭菌，并确认灭菌彻底，无染菌现象；培养萌发：将上步骤中灭菌完全的种子置于间歇浸没式生物反应器内进行培养，在间歇浸没式生物反应器中加入含有SNP的灭菌蒸馏水，接种重楼种子，种子间歇浸没频率为3～5分钟/6h，在阴暗环境下进行培养。本发明中采用硝普钠与间歇浸没式生物反应器相结合的方法，能够使重楼种子快速萌发。

技术领域

本发明涉及一种用硝普钠(SNP)与间歇浸没式生物反应器相结合使重楼种子快速萌发成苗的方法，属于珍稀药用植物繁殖技术领域。

背景技术

重楼(Paris)是百合科重楼属的多年生草本植物，是一种重要的中药材，其中滇重楼和七叶一枝花的干燥根茎组织在《中国药典》(2015版)中被认定为常用药材重楼的药源。现代药理学表明，重楼的根茎具有镇静镇痛、平喘、止血及抑菌消炎等作用，特别是近年来发现其在抗肿瘤方面疗效显著。因此，在经济利益驱动下，重楼野生资源被不断的掠夺式采挖，濒临灭绝。因此进行人工繁殖，不仅能保护滇重楼的野生资源，并且能满足不断增长的市场需求。

当前生产上常用的人工繁殖方式以根茎繁殖法为主。根茎切块繁殖虽然目前最为成功，但依然有缺点与不足之处。第一，根茎是经济器官，切割后会增加成本，且用种量大。第二，需大量留种，易发生腐烂，并遭受鼠害侵袭。第三，繁殖系数虽高，但周期长，无法满足生产需要。而利用种子进行人工繁育，具有繁殖系数大、生产成本低等优点，还可以避免根状茎繁殖对药用部分的消耗，大大提高繁殖系数，又能降低组织培养引起的遗传变异风险，是缓解重楼资源短缺的有效途径。然而，重楼生长繁殖缓慢，自然状态下，种子播种需要两冬一夏才能萌发，此后还要继续生长5-7年才能入药，这一缺点严重限制了重楼的来源。因此，人工打破种子休眠，提高发芽率，已成为大规模人工繁育重楼所要面临的重要课题。

目前变温层积促进重楼种子萌发是采用较多的方法，即将种子进行高温和低温交替处理，从而促进种子提早萌发，但是该过程的处理时间也较长，一般需要120-200天。此外，利用植物激素如GA₃、CTK和化学药剂PEG等对重楼种子进行处理，也能在不同程度上促进种子的萌发。虽然这些种子繁育技术均能一定程度上促进种子的萌发，但是在实际生产中发现，层积和激素处理所耗费的时间仍然较长。并且由于重楼种子萌发周期较长，在促萌过程中也常常需要进行人工补水、换气等工作，因此常常会出现水分和通气状况掌握不当而导致种子腐烂和发霉，所以有必要研究出更加高效快速的方法来促进种子萌发，从而在根本上解决重楼稀缺的现状。

一氧化氮是一种气体信号分子，它具有解除植物种子休眠的作用。硝普钠(SNP)是一氧化氮的供体，其水溶液能够促进种子的萌发，本实验室的前期研究中发现，利用适当浓度的硝普钠水溶液浸泡处理重楼种子，能够快速促进种子萌发。然而硝普钠溶液在提供一氧化氮的同时，还会释放出有毒的氰化物，因此长时间浸泡处理会对种子产生毒害作用。相反，若浸泡时间过短则不能起到有效促进萌发的效果。

发明内容

为克服现有的重楼种子萌发技术中种子处理操作麻烦且萌发时间长的缺点，本发明提供了一种用硝普钠与间歇浸没式生物反应器相结合的方法使重楼种子快速萌发的方法。

实现本发明上述目的所采用的技术方案为：

一种促使重楼种子快速萌发成苗的方法，包括以下步骤：(1)对采摘的重楼种子进行预处理：将采摘的成熟的重楼种子除去外种皮，冲洗干净后将种子放在室内阴干，然后放置于0～4℃下备用；

(2)检查间歇浸没式生物反应器的密闭性，然后对间歇浸没式生物反应器进行灭菌处理；

(3)取步骤(1)中的重楼种子，先用水浸泡过夜，使种子充分吸胀变得圆润饱满，然后在无菌条件下为种子灭菌，并确认灭菌彻底，无染菌现象；