[发明专利]一种用于检测CYP2C19基因多态性的组合物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于检测CYP2C19基因多态性的技术。

背景技术

氯吡格雷(Clopidogrel)，属于噻吩吡啶类抗血小板药物，第二代ADP受体拮抗剂。氯吡格雷为无活性的药物前体，需经肝细胞内细胞色素P450酶系活化，其中约85％被酯化为无活性的代谢产物经肠道代谢，仅有约15％氯吡格雷被活化生成具有活性的代谢产物发挥其抗血小板药理作用。

氯吡格雷是治疗急性冠状动脉综合征和经皮冠状动脉介入术后抗栓的基础药物，但4％～30％患者在治疗期间出现氯吡格雷疗效下降，甚至出现氯吡格雷抵抗。氯吡格雷为前体药，主要依赖于CYP2C19代谢生成活性代谢产物，发挥抗血小板疗效。CYP2C19基因存在多态性，其酶有四种不同的代谢类型：快代谢型(RM，*1/*1)；超快代谢型(UM，*17/*17)；中间代谢型(IM，*1/*2，*1/*3，*17/*2，*17/*3)；慢代谢型(PM，*2/*2，*2/*3，*3/*3)。中国人群中14％为CYP2C19慢代谢型，常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加；而在超快代谢型患者中产生活性代谢产物增加，抑制血小板聚集作用增强，出血风险增加。2010年美国FDA修改的氯吡格雷说明书中黑框警示：CYP2C19基因型检测结果应作为医生调整治疗策略的参考，对于CYP2C19PM型患者，建议考虑调整治疗方案或治疗策略。

人CYP2C19基因具有遗传多态性，CYP2C19至少有36种等位基因，其中CYP2C19*2和CYP2C19*3占亚洲人群弱代谢表型的99％以上，CYP2C19*17是目前发现的唯一具有超快活性的基因分型。2010年FDA提出黑框警告，明确建议医生对将要服用氯吡格雷的患者进行CYP2C19基因分型检测，针对患者基因型实施个性化用药。临床研究表明，CYP2C19基因突变导致的弱代谢个体，栓塞重新形成的风险增加，心脑血管事件的发生风险增加，病死率升高。对于这类个体，需要增加氯吡格雷的剂量(负荷剂量为300mg或600mg)，以达到阻断血小板聚集的效果。CYP2C19功能缺失性等位基因携带者的心血管事件和中风的死亡率增加51％(12.1％vs.8.0％)。

因此，CYP2C19基因多态性检测对于氯吡格雷用药有重要意义。而目前检测CYP2C19基因多态性的核苷酸引物及方法准确性和特异性较低，难以在临床广泛应用。所以探索一种检测CYP2C19基因多态性快速可靠的核苷酸引物组及方法已经成为临床实验研究的热点问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测CYP2C19基因多态性的组合物及其应用，通过调整引物的配比、Taq酶的用量和镁离子的用量等，通过FAM、HEX、ROX(修饰)三通道多重PCR反应，并且将引物放置到一管内分型检测，提高检测的简便性和特异性，使得整个操作以及反应过程简单化。并在此基础上，对探针进行锁核酸修饰和二级结构修饰，增加探针的Tm值，进一步提高探针结合的特异性的，最后通过上述体系的调整，使得准确性和特异性均能够达到100％，最低检测浓度能够达到1ng/μL，解决了以往检测CYP2C19基因多态性时准确性和特异性较低的问题。

为了实现上述目的，本发明提供的一种用于检测CYP2C19基因多态性的组合物，包括针对用于检测待检样品中与CYP2C19基因相关的特异性目的基因的引物对和探针，包括：

CYP2C19*2引物：

CYP2C19*2基因正向引物(CYP2C19*2-F):ATTATTGTTTTCTCTTAGATAT(SEQ ID NO.1)；

CYP2C19*2基因反向引物(CYP2C19*2-R):TCTCCAAAATATCACTTTC(SEQ ID NO.2)；

探针CYP2C19*2-GFP：FAM-TGGGTTATTTCCCGGGAACCCA-BHQ1(SEQ ID NO.3)；

探针CYP2C19*2-AFP：ROX-GTTATTCCCAGGAACCCATAAC-BHQ2(SEQ ID NO.4)；

CYP2C19*3引物对：

CYP2C19*3基因正向引物(CYP2C19*3-F):TTAACTTGATGGAAAAA(SEQ ID NO.5)；

CYP2C19*3基因反向引物(CYP2C19*3-R):GACTGTAAGTGGTTTCT(SEQ ID NO.6)；